Versican基因RNAi慢病毒载体的构建及其对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用
本文关键词：Versican基因RNAi慢病毒载体的构建及其对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用
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【摘要】：目的构建Versican基因RNAi慢病毒载体并研究Versican对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用。方法根据人Versican基因序列,构建4个携带RNAi序列的慢病毒载体,利用293T细胞进行慢病毒包装。实验分为Control组(不做处理)、NC组(用空慢病毒载体包装的病毒转染细胞)和KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒感染组。应用KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒及NC慢病毒感染H1299细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Real-time PCR检测Versican的表达,筛选出感染效率和特异性最高的慢病毒载体进行下一步研究。用慢病毒感染毛乳头细胞后,用Real-time PCR检测Versican基因的表达,并用Western blot检测Versican、ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达,应用光镜观察毛乳头的生长情况。结果成功构建4种慢病毒载体,其中KD2慢病毒感染H1299细胞较其他慢病毒、Control和NC组显著下调Versican mRNA的表达(P0.01)。应用KD2慢病毒感染毛乳头细胞后,较Control和NC组明显下调毛乳头细胞Versican mRNA和蛋白的表达(P0.01),ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达较Control组明显下调(P0.01),毛乳头细胞聚集性生长的特性消失。结论成功构建了Versican基因RNAi慢病毒载体。Versican基因通过c-JUN-ADAMTS-4通路调控毛乳头细胞的聚集性生长。
【作者单位】： 第三军医大学大坪医院野战外科研究所呼吸科;第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科;
【关键词】： 多功能蛋白聚糖类 RNA干扰 慢病毒 毛乳头细胞 聚集性生长
【基金】：国家自然科学基金面上项目(30771934)~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)是位于毛囊延髓区的一种成纤维细胞,其主要作用是调节毛囊的发育和再生[1-2]。而毛乳头细胞是否具有诱导毛囊发育和再生的能力主要取决于毛乳头的聚集生长[3-4]。研究发现体外培养的毛乳头细胞在低代数(㩳7代)时呈聚集性生长。聚集性生
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