重组人血管生成素制备和生物活性鉴定

发布时间：2017-07-16 12:33

  本文关键词：重组人血管生成素制备和生物活性鉴定

  更多相关文章： 血管生成素 原核表达 核糖核酸酶活性 管腔形成 细胞核转位

【摘要】：血管生成素(angiogenin,ANG)是一种很强的促血管生成因子,与肿瘤的发生发展有着密切的关系,拮抗ANG被认为是抗肿瘤血管靶向治疗的一个有效途径.同时,ANG具有促进伤口愈合、保护神经元以及抗细菌感染等活性.但是,开展相关研究所需的最基本的天然ANG蛋白来源非常有限,大规模表达和纯化有生物活性的重组血管生成素蛋白(r ANG)具有广泛的应用前景.我们可以在大肠杆菌中表达r ANG,但表达产物在胞内聚集形成不溶性的包含体,需经变性、复性、阳离子交换层析和反向C18的HPLC方法纯化后,才能获得高纯度的r ANG.经SDS-PAGE鉴定,纯化蛋白质为单一条带,质谱鉴定蛋白分子量与理论分子量一致.经体外活性检测,证实纯化的蛋白质具有核糖核酸酶活性、促内皮细胞管腔形成和细胞核转位等生物学活性.本文详细描述了r ANG的表达、纯化、活性鉴定等过程和所使用的方法与技术.
【作者单位】： 浙江大学医学院环境医学研究所;浙江大学医学院分子医学研究中心;
【关键词】： 血管生成素 原核表达 核糖核酸酶活性 管腔形成 细胞核转位
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.31170721,No.31400648)资助~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 血管生成素(angiogenin,ANG)是第一个基于血管生成活性从人结直肠癌细胞HT-29培养液中分离和纯化的细胞因子(产量约为500 ng/L)[1].ANG有微弱的核糖核酸酶活性,属于核糖核酸酶A超家族成员[1,2].目前认为,ANG与肿瘤、神经退行性疾病、组织损伤修复、糖尿病引起的视网膜受损等疾

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 吴丽金,陈宇光;包含体内重组蛋白质的复性[J];生命的化学;2001年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 温茜;马骊;苏瑾;罗微;王小宁;;小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的表达、纯化与鉴定[J];南方医科大学学报;2006年08期

2 梁海勇;李骞;陈金军;;蜘蛛毒素研究进展[J];检验医学与临床;2013年19期

3 刘先俊,刘方欣,漆洪波;重组人瘦素的分离纯化[J];重庆医科大学学报;2003年04期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 刘朝辉;黄瓜花叶病毒运动蛋白与微丝作用关系及胞间连丝通透性调节机制的研究[D];中国农业大学;2005年

2 占利;淋球菌外膜蛋白NspA在大肠杆菌中高效表达及其性能的初步研究[D];四川大学;2006年

3 张明;牛IFNτ基因成熟蛋白CDS区的克隆、原核表达及其在妊娠建立过程中的生物学功能研究[D];四川农业大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 宋晓晖;H5N1亚型禽流感病毒HA1基因在大肠杆菌中的表达与纯化[D];中国农业大学;2003年

2 汤辉;虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ和ω-芋螺毒素MVIIA嵌合体的合成和活性鉴定[D];湖南师范大学;2002年

3 喻志强;虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ（HWTX-Ⅰ）突变体及天然ω-芋螺毒素MVIIA的合成和活性鉴定[D];湖南师范大学;2002年

4 姚建聪;猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株GP5单克隆抗体的研制[D];中国农业大学;2004年

5 苗佩宏;hTERT蛋白表达及其模拟表位筛选[D];第一军医大学;2004年

6 刘文华;2型RA42KDa外膜蛋白的原核表达及免疫活性研究[D];中国农业大学;2005年

7 符芳;新城疫病毒La Sota株F和HN基因的克隆表达及免疫原性分析[D];河北农业大学;2006年

8 傅容湛;牛血清白蛋白变性复性过程及其部分折叠中间体的研究[D];西北大学;2006年

9 温茜;双功能分子hIL-2/mGM-CSF蛋白的改建、表达、纯化及功能的初步研究[D];第一军医大学;2006年

10 李茜;H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆与表达及ELISA检测方法的初步建立[D];河北农业大学;2007年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 彭辰;葛昊;何书英;高向东;;重组巴氏杆菌透明质酸合成酶的克隆、表达及活性鉴定[J];中国药科大学学报;2009年06期

2 张德震,张劲一,孙仑泉;菜豆凝集素的分离纯化及活性鉴定[J];第四军医大学学报;1987年01期

3 邹冬辉;张家颖;路英丽;郭焱;王忠山;;重组人前列腺特异性抗原纯化与活性鉴定[J];吉林大学学报(医学版);2008年01期

4 肖乐;王琴;蔡昆;屠伟;侯晓军;李涛;王慧;;肠出血性大肠杆菌转移紧密黏附素受体的表达及其活性鉴定[J];现代生物医学进展;2010年09期

5 张薇;高红梅;叶贤龙;于艺雪;刘铭瑶;王文飞;任桂萍;李德山;;小鼠白细胞介素17A的克隆、表达及活性鉴定[J];中国免疫学杂志;2010年09期

6 孙安源,孙，

本文编号：548729