恶性疟疾疫苗M.RCAg-1的中试制备及其与不同佐剂配伍的免疫原性研究

发布时间：2017-07-19 06:10

  本文关键词：恶性疟疾疫苗M.RCAg-1的中试制备及其与不同佐剂配伍的免疫原性研究

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【摘要】：疟疾作为世界三大传染病之一仍然威胁着人类的健康。WHO最新数据显示,2012年全球有627000入因感染疟疾而死亡,而这其中平均每天有1300条年轻的生命被疟疾夺走,大部分是非洲五岁以下的儿童。由于耐药性疟原虫虫株和抗杀虫剂雌性按蚊的出现及扩散,使得传统预防和治疗疟疾的方法面临威胁。因此,研发出一种安全、有效、经济的疟疾疫苗以降低疟疾的发病率和死亡率成为当务之急。 据文献报道,恶性疟原虫红内期疫苗候选抗原单独或简单联合使用时的免疫效果并不理想,因此多抗原多表位重组蛋白疫苗成为疟疾疫苗研究的方向之一。课题组前期通过“表位改组”技术构建了疟原虫随机重组抗原-1(malaria random constructed antigen-1, M. RCAg-1),作为恶性疟疾多表位人工随机重组蛋白疫苗的M.RCAg-1在BALB/c小鼠、新西兰兔、非人灵长类动物模型中被证实具有很好的免疫原性和体内外保护性,极有研发前景。 本研究在前期工作建立的M. RCAg-1工程菌基础上,通过协同合作,使用30L的发酵罐中试规模发酵培养M.RCAg-1工程菌,并对M.RCAg-1中试规模的纯化工艺进行改进,建立了一条简便可行的M.RCAg-1的中试规模高效制备工艺。此外,为增强M. RCAg-1的免疫原性,本研究选用了两种极具有临床应用前景的Toll样受体激动剂类的吡喃葡萄糖基脂佐剂(glucopyranosyl lipid adjuvant, GLA)与其配伍,并在BALB/c小鼠模型中评价在各佐剂作用下疫苗的免疫效果,进而筛选出最佳佐剂,为随后进行的M.RCAg-1的临床前研究奠定基础。主要取得以下进展： 1.协助合作方,成功摸索出M. RCAg-1的中试规模的发酵与纯化工艺,经两步纯化后获得了纯度大于95%,回收率为53.2%左右的中试M.RCAg-1蛋白； 2.从与M. RCAg-1配伍的佐剂中筛选出增强其免疫原性的能力最强的佐齐GLA-SE,确定该佐剂的最佳免疫剂量为5ug。 3.将中试M. RCAg-1分别与GLA-SE佐剂和弗氏佐剂配伍免疫BALB/c小鼠的,经对其免疫后血清抗体及脾淋巴细胞进行分析,初步证实GLA-SE是一个很有潜力的多表位蛋白疫苗M. RCAg-1候选佐剂。
【关键词】：恶性疟原虫 疫苗 发酵 纯化 佐剂
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-9
• 实验材料9-13
• 实验方法13-31
• 实验结果31-44
• 讨论44-48
• 结论48-49
• 参考文献49-51
• 文献综述51-59
• 参考文献56-59
• 附录59-61
• 致谢61-62
• 个人简历62-63

【参考文献】

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1 乔彦良,孙爱玉,李桂华,赵金东,郭步术,遇欣,盛英霞,杨汉春;西咪替丁对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响[J];山东家禽;2002年01期

2 孙成金;王健;丁军颖;郭鹏;郑凡;张振龙;;多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1在大肠杆菌表达的条件优化和大规模培养[J];微生物学免疫学进展;2009年03期

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本文编号：561503