狂犬病病毒糖蛋白膜外区重组基因的表达与鉴定

发布时间：2017-07-19 21:21

  本文关键词：狂犬病病毒糖蛋白膜外区重组基因的表达与鉴定

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【摘要】：目的构建狂犬病病毒糖蛋白外膜区基因质粒并在大肠埃希菌中表达,为研制狂犬病病毒抗原诊断试剂盒奠定基础。方法采用RT-PCR方法扩增狂犬病病毒CTN株糖蛋白膜外区基因,目的片段与表达载体PET32a(+)分别经双酶切、胶回收后连接并转化至E.coli BL21(DE3)菌株。阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE分析后进行纯化,利用Western blot鉴定其反应原性。结果以狂犬病病毒CTN株为模板扩增的糖蛋白膜外区基因片段经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定大小为1 323bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定后转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达的融合蛋白分子质量单位大小约为66.6ku,与理论值相符;重组菌在IPTG终浓度为1mmol/L,诱导时间为4h,温度为37℃时蛋白表达产量最高。该融合蛋白主要以包涵体形式存在,可被His标签抗体识别。结论成功表达了狂犬病病毒糖蛋白膜外区蛋白,该蛋白反应原性良好,为研制狂犬病病毒抗原诊断试剂盒奠定了基础。
【作者单位】： 潍坊医学院医学检验学系;潍坊医学院基础医学院病原生物学教研室;
【关键词】： 狂犬病病毒 糖蛋白膜外区 基因克隆 原核表达
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81170080)
【分类号】：R373
【正文快照】： ***狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种严重的人兽共患传染病,目前尚无有效的治疗方法,病死率几乎为100%。狂犬病发生于世界上的80多个国家和地区,全世界每年约有5.5万人死于狂犬病[1-2]。我国狂犬病发病率自1998年以来呈逐年上升趋势[3],已成为严重

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本文编号：564879