HPV16型E7抗原CTL表位模拟肽及初步免疫学效应研究

发布时间：2017-07-26 14:11

  本文关键词：HPV16型E7抗原CTL表位模拟肽及初步免疫学效应研究

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【摘要】：方法： 1根据野生表位肽RAHYNIVTF的结构和初步血浆实验结果，确定改造部位，将得到的模拟表位肽进行分子动力学模拟和结合自由能的计算。 2采用标准Fmoc方案固相合成技术对表位模拟肽进行合成、纯化和分子量鉴定。 3运用T2细胞对野生型表位肽和表位模拟肽与HLA-A2分子亲和力进行分析。 4采用标准的乳酸脱氢酶方法检测人的毒性T淋巴细胞对于T2靶细胞的免疫杀伤效应。 结果： 1根据表位肽的结构和初步实验结果，分别在将1位和4位点用D型氨基酸单突变和双突变替换，得到①（d）RAHYNIVTF，②RAHY(d)NIVTF,③（d）RAH（d）YNIVTF3条表位模拟肽。 2分子动力学结果表明：野生型表位肽和表位模拟肽与MHC-I分子的结合比较稳定，，与各个口袋中氨基酸结合也比较合理。 3对合成的表位模拟肽纯度和分子量进行分析，证明纯度均已达到95%以上，分子量和目标化合物相吻合，可为后续实验所用。 4亲和力实验发现野生型表位肽为中等亲和力，改造后的①（d）RAHYNIVTF FI值最高，与HLA-A2亲和力最强，而另两条D型改造的模拟肽则完全没有亲和力。 5运用乳酸脱氢酶方法对野生型表位肽和3条表位模拟肽刺激的CTL进行杀伤效果测试，野生型表位肽为57.87%，①表位模拟肽为33.46%，而其他两条没有明显的杀伤效果。 结论 1采用血浆中稳定性实验，首次分析了野生型表位肽的体外半衰期。 2用D型氨酸替换的模拟表位肽可以有效提高在血浆中酶的耐受性。 3体外细胞实验中证明了①（d）RAHYNIVTF可以诱导CTL产生杀伤作用，但没有野生型表位肽效果好。 从以上结论得出，虽然改造的①（d）RAHYNIVTF免疫原性降低，但体外半衰期明显延长，且亲和力也增强，如果通过佐剂或者其他辅助的修饰，以提高其免疫原性，将有可能得到稳定，亲和力高，免疫效果强的表位模拟肽，为治疗性CTL疫苗的设计进一步奠定基础。
【关键词】：人乳头瘤病毒 表位 MHC I分子 细胞毒性T淋巴细胞 分子修饰 计算机辅助药物设计
【学位授予单位】：重庆理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-11
• 英文缩写一览表11-13
• 1 绪论13-23
• 1.1 HPV 分型13
• 1.2 HPV 生物学结构13-14
• 1.3 HPV16 的致癌机制14-15
• 1.4 HPV 反复感染的原因15-16
• 1.5 HPV16 E7 的结构与功能16
• 1.6 HPV 疫苗及研究现状16-20
• 1.6.1 DNA 疫苗18
• 1.6.2 活的载体疫苗18-19
• 1.6.3 多肽类疫苗19-20
• 1.6.5 蛋白质疫苗20
• 1.7 研究目的和意义20
• 1.8 主要研究方法和主要技术路线20-23
• 2 HPV16 型 E7 抗原 CTL 表位模拟肽的设计与合成23-31
• 2.1 引言23-25
• 2.2 实验材料25
• 2.2.1 主要实验材料25
• 2.2.2. 主要实验试剂25
• 2.2.3. 主要实验仪器25
• 2.3 实验方法25-26
• 2.3.1 多肽的合成与鉴定25-26
• 2.3.2 多肽的冻干和储存26
• 2.3.3 野生型肽在人血浆中的稳定性26
• 2.4 结果26-29
• 2.4.1 野生型表位肽的纯化和质谱鉴定结果26-27
• 2.4.2 LC-MS 检测酶解结果27-29
• 2.5 讨论29-31
• 3 分子动力学模拟和表位模拟肽的合成31-47
• 3.1 引言31-35
• 3.2 动力学实验35-41
• 3.2.1 实验材料35
• 3.2.2 实验方法35
• 3.2.3 结果35-41
• 3.3 模拟表位肽的的合成、纯化、鉴定41-44
• 3.4 讨论44-47
• 4 HPV16E7 表位肽和表位模拟肽的血浆中稳定性实验47-53
• 4.1 引言47-48
• 4.2 实验材料48-49
• 4.2.1 主要实验材料48
• 4.2.2 主要实验试剂48
• 4.2.3 主要实验仪器48-49
• 4.3 实验方法49
• 4.4 结果49-50
• 4.5 讨论50-53
• 5 野生型肽与表位模拟肽与 HLA-A2 分子的亲和力53-61
• 5.1 引言53-54
• 5.2 实验材料54-55
• 5.2.1 主要实验材料54
• 5.2.2 主要实验试剂及配制54
• 5.2.3 主要实验仪器54-55
• 5.3 实验方法55-56
• 5.3.1 细胞的复苏和培养55
• 5.3.2 细胞的冻存55
• 5.3.3 T2 细胞-抗原肽亲和力实验55-56
• 5.4 结果56-58
• 5.5 讨论58-61
• 6 HPV16 型 E7 抗原 CTL 表位模拟肽体外杀伤效应61-67
• 6.1 实验材料61-62
• 6.1.1 主要实验材料61
• 6.1.2 主要实验试剂61
• 6.1.3 主要实验仪器61-62
• 6.2 实验方法62-64
• 6.2.1 效应细胞的制备62
• 6.2.2 靶细胞 T2 的制备62
• 6.2.3 CTL 细胞的杀伤力测定（乳酸脱氢酶释放法）62-64
• 6.3 结果64-65
• 6.4 讨论65-67
• 全文总结67-69
• 参考文献69-75
• 致谢75-76
• 个人简历、在校期间发表的学术论文及取得的研究成果76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 张茂祥,张富春;人乳头瘤病毒16型E7疫苗的研究进展[J];地方病通报;2003年02期

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本文编号：576784