芪葵颗粒对糖尿病肾病模型及人系膜细胞MCP-1表达的影响

发布时间：2017-07-29 16:06

  本文关键词：芪葵颗粒对糖尿病肾病模型及人系膜细胞MCP-1表达的影响

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【摘要】：目的：观察芪葵颗粒对糖尿病肾病大鼠尿蛋白及肾组织单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达的影响,以及芪葵颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞MCP-1表达的影响,探讨芪葵颗粒防治糖尿病肾病的疗效及可能机制。 方法：体内试验：通过高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(streptozocin, STZ)建立2型糖尿病模型。将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、中药组及厄贝沙坦组。每两周测量体重1次,剪尾端取血测血糖1次；大鼠处死前,用代谢笼收集24h尿,用于测定24h尿蛋白(UTP)、尿微量白蛋白/肌酐比值(mAlb/Cr);颈动脉取血,用于测定血糖(Glu)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)；处死后取双肾,称量肾重,将肾组织进行HE染色观察肾组织结构变化,并通过免疫组织化学法定位并定量MCP-1的表达。 体外实验：对数生长期的HRMC分为3大组：A大组、B1大组及B2大组。A大组分为以下6组：NG(正常对照组,5mmol/L葡萄糖),Man(甘露醇渗透压对照组,5mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇),HG(高糖组,30mmol/L葡萄糖),S2(2mg生药组,30mmol/L葡萄糖+2mg/mL生药),S1(1mg生药组,30mmol/L葡萄糖+1mg/mL生药),S0.5(0.5mg生药组,30mmol/L葡萄糖+0.5mg/mL生药)(生药浓度由MTT筛选得到)。B1大组组分为以下6组：NLG1(10%正常血清低糖,5mmol/L葡萄糖)、NHG1(10%N常血清高糖组,30mmol/L葡萄糖)、LLG1(10%低剂量血清低糖组,5mmol/L葡萄糖)、LHG1(10%低剂量血清高糖组,30mmol/L葡萄糖)、HLG1(10%高剂量血清低糖组,5mmol/L葡萄糖)、HHG1(10%高剂量血清高糖组,30mmol/L葡萄糖)。B2大组分为以下6组：NLG2(20%正常血清低糖组,5mmol/L葡萄糖)、NHG2(20%正常血清高糖组,30mmol/L葡萄糖)、LLG2(20%低剂量血清低糖组,5mmol/L葡萄糖)、LHG2(20%低剂量血清高糖组,30mmol/L葡萄糖)、HLG2(20%高剂量血清低糖组,5mmol/L葡萄糖)、HHG2(20%高剂量血清高糖组,30mmol/L葡萄糖)。采用RealTime-RT-PCR检测培养24h后MCP-1mRNA的表达,western blot法检测MCP-1蛋白的表达,ELISA法检测培养上清液MCP-1蛋白的分泌。 结果：体内实验：中药组大鼠和模型组大鼠相比,体重明显增加(P0.01),肾重及肾重/体重比值明显下降(P0.01),血糖降低(P0.05),总胆固醇降低(P0.01),尿素氮明显低于模型组(P0.05),24h尿蛋白明显降低(P0.01)。模型组大鼠肾小球增生明显,肾小球毛细血管丛有明显玻璃样变、硬化,系膜基质增多,基膜坍塌,肾小球毛细血管管腔闭塞,中药组肾脏病理改变较上述明显减轻。肾脏免疫组化示：中药组肾小球及肾小管间质MCP-1表达量较模型组明显减少。 体外实验：在A大组：S2较HGMCP-1蛋白分泌减少(P0.05)。B1大组：HHG1MCP-1蛋白表达水平较NHG1明显降低(P0.05); HLG1MCP-1蛋白分泌较NLG1明显减少(P0.05)。B2大组：HLG2MCP-1蛋白分泌较NLG2明显减少(P0.05)；与NHG2相比,HHG2mRNA表达、蛋白表达及分泌水平均明显降低(P0.05)。 结论：芪葵颗粒可以降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白、血尿素氮、血糖、血脂水平,降低肾脏MCP-1表达,改善糖尿病肾病大鼠肾脏病变；可以减少高糖培养下人肾系膜细胞MCP-1的mRNA和蛋白质的表达。推测芪葵颗粒可能通过改善肾脏炎症,从而达到延缓糖尿病肾病的肾脏保护作用。
【关键词】：芪葵颗粒 糖尿病肾病 糖尿病大鼠 人肾小球系膜细胞 MCP-1
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R259;R277.5;R-332
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 第一部分 理论研究12-33
• 1. 中医对糖尿病肾病的研究进展12-17
• 1.1. 病名12-13
• 1.2 病因13
• 1.3 病机13-15
• 1.4 糖尿病肾病中医治疗的研究15-17
• 2. 现代医学对糖尿病肾病的研究进展17-29
• 2.1 糖尿病肾病的发病机制17-24
• 2.2 糖尿病肾病的流行病学24-26
• 2.3 糖尿病肾病的诊断与筛查26-27
• 2.4 糖尿病肾病的治疗27-29
• 3. 芪葵颗粒方药分析及现代药理学研究29-31
• 3.1 芪葵颗粒处方来源、组方及功用29-30
• 3.2 芪葵颗料药物的现代药理研究30-31
• 4. 单核细胞趋化蛋白131-33
• 第二部分 实验研究33-55
• 1. 实验材料33-37
• 1.1 实验动物33
• 1.2 细胞系33
• 1.3 实验药物33
• 1.4 主要试剂33-35
• 1.5 主要仪器设备35-36
• 1.6 主要溶液配制36-37
• 2. 试验方法37-42
• 2.1 体内试验37-39
• 2.2 体外试验39-42
• 2.3 统计学方法42
• 3. 实验结果42-52
• 3.1 体内试验42-48
• 3.2 体外实验48-52
• 4. 讨论52-55
• 结语55-56
• 参考文献56-60
• 附录60-61
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果61-62
• 致谢62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 谌洁;吕仁和对糖尿病肾病分期辨证用膳的经验[J];北京中医;2004年04期

2 何泽;南征;朴春丽;韩辅;张睿;包扬;米佳;李金博;陈曦;;糖尿病肾病中医规范化治疗方案研究[J];长春中医药大学学报;2010年03期

3 左爱欣;;糖尿病肾病的中医临床辨证用药[J];中国医药导刊;2008年05期

4 许友明;林扬芳;李悦s，

本文编号：589947