突变p53对雌系生殖的影响

发布时间：2017-07-29 17:03

  本文关键词：突变p53对雌系生殖的影响

  更多相关文章： p53 LIF 胚胎植入 p53通路 SNP

【摘要】：p53基因作为一个重要的抑癌基因,突变后的功能越来越受到关注。近年来研究发现p53基因能影响到雌系生殖,具体机制是通过转录调控下游的白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor, LIF)促进胚胎的植入和子宫组织脱膜化进程。p53基因的突变形式大都为点突变,然而在p53基因结合区的突变会导致P53蛋白的构象发生改变,影响p53基因调控下游基因的转录激活功能,促进肿瘤的发生,那么p53基因突变后是否具有其他方面的功能呢? p53N236S是p53基因结合区的一个低频突变,它具有促进肿瘤的形成的功能。在研究p53N236S促进肿瘤的发生过程中,发现p53N236S会导致雌鼠的生殖能力下降。研究中发现,p53N236S在胚胎植入时对其下游基因白血病抑制因子的调节能力下降。p53N236S基因型雌鼠的生殖能力下降是因为胚胎植入失败,还是胚胎致死引起的尚需进一步的证实。LIF是胚胎植入时重要的蛋白因子,它能促进胚胎的植入和蜕膜化的进程。 本文分别从p53N236S小鼠的种群水平、个体水平和细胞水平三个方面研究p53N236S对雌系生殖的影响。研究发现,p53s/+基因型雌鼠的产仔数为4.46±0.45只显著低于野生型雌鼠的7.92±0.95只,然而p53s/s基因型雌鼠的产仔数仅为2.67±0.58只。小鼠的个体水平,通过免疫组化的方法对d4天雌鼠子宫组织进行分析,发现野生型p53的雌鼠的p53蛋白表达水平最低,LIF的表达水平最高；而p53s/s基因型雌鼠的p53蛋白表达水平最高,LIF的表达水平最低。这表明胚胎植入时会促进p53的表达,进而上调LIF的水平促进胚胎植入,一旦LIF的表达水平不足,可能会反馈P53蛋白上调。研究中还发现ER α在三种基因型的雌鼠中表达水平无明显差异,表明p53N236S突变不会影响ER α的表达。细胞水平上,将p53与LIF基因的结合区DNA构建到GFP报告载体中,转染p53+p53s/+和p53s/s三种细胞,通过荧光光强来评测三种基因对LIF的调控能力,对比发现p53+/+对LIF的调控能力最强,p53s/s最弱。 由此在细胞水平、动物个体水平和小鼠种群三个方面可知,雌鼠中p53N236S位点突变会导致“窗口期”LIF的表达水平降低,进而可能导致胚胎植入失败影响雌鼠的生殖能力,而p53N236S位点突变在雄鼠中对生殖的显著影响还尚不可知。
【关键词】：p53 LIF 胚胎植入 p53通路 SNP
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 研究背景12-24
• 1.1 P53通路及其家族蛋白对生殖的影响12-19
• 1.1.1 p53基因在肿瘤和生殖方面的作用12-15
• 1.1.2 p53通路对生殖的影响15-17
• 1.1.3 p53家族蛋白对生殖的影响17-19
• 1.2 LIF在胚胎植入时的功能19-22
• 1.2.1 LIF在哺乳动物胚胎植入时的作用19-20
• 1.2.2 LIF通过Jak-SATAs通路调控胚胎植入相关因子20-21
• 1.2.3 雌二醇对LIF的调节功能21-22
• 1.3 P53N236S的背景介绍22-23
• 1.4 研究意义23-24
• 第二章 p53N236S基因型小鼠的生殖24-33
• 2.1 材料和试剂24-26
• 2.1.1 材料24-25
• 2.1.2 试剂25-26
• 2.1.3 主要仪器及软件26
• 2.2 方法26-28
• 2.2.1 小鼠DNA提取26-27
• 2.2.2 小鼠基因型鉴定27
• 2.2.3 小鼠繁育组的设置27-28
• 2.3 结果28-31
• 2.4 讨论31-33
• 第三章 P53N236S在胚胎植入期对LIF的影响33-45
• 3.1 材料与方法33-34
• 3.1.1 材料33
• 3.1.2 仪器33-34
• 3.1.3 软件34
• 3.2 方法34-41
• 3.2.1 Plug的观察34
• 3.2.2 石蜡切片34-36
• 3.2.3 HE染色36-37
• 3.2.4 免疫组化(IHC)37-38
• 3.2.5 总RNA的提取及cDNA制备38-40
• 3.2.6 RT-PCR40-41
• 3.3 结果41-43
• 3.3.1 植入期p53、 ER α和LIF的表达水平41-42
• 3.3.2 p53、ERa和LIF-mRNA表达水平42-43
• 3.4 讨论43-45
• 第四章 细胞水平上P53N236S对LIF表达水平的影响45-60
• 4.1 仪器与试剂45-47
• 4.1.1 仪器45-46
• 4.1.2 试剂46-47
• 4.2 方法47-58
• 4.2.1 GFP报告基因载体的构建47-54
• 4.2.2 小鼠MEF细胞的制备54-55
• 4.2.3 MEF细胞的培养、冻存及复苏55-57
• 4.2.4 转染57-58
• 4.3 结论58-59
• 4.4 讨论59-60
• 第五章 总结与展望60-62
• 致谢62-63
• 参考文献63-71
• 附录71

【共引文献】

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本文编号：590151