BAFF拮抗肽活性的研究

发布时间：2017-07-30 04:16

  本文关键词：BAFF拮抗肽活性的研究

  更多相关文章： BAFF 多肽 BAFF拮抗剂

【摘要】：BAFF为B淋巴细胞刺激因子，属于肿瘤坏死因子超家族中的一员，在B淋巴细胞的发展，成熟，抗体分泌过程中起重要的作用，是正常机体免疫必不可少的。研究发现BAFF表达失调与许多疾病之间存在一定的联系，如自身免疫缺陷、系统性红斑狼疮(SLE)、感染和恶性肿瘤等等。目前，，针对BAFF的拮抗剂主要有：抗BAFF抗体，BAFF受体抑制剂、BAFF相关免疫毒素等等。其中BAFF单克隆抗体-Belimumab已获得美国FDA的批准，应用于治疗SLE疾病，这充分肯定了以BAFF为靶点治疗疾病的可行性。但是，在BAFF拮抗剂的临床应用中，仍有很多问题有待解决，例如，稳定性和副作用。本课题的主要目的是研究三个多肽对BAFF与其受体结合的抑制作用，进而探索小分子多肽作为BAFF拮抗剂的可行性，为BAFF拮抗肽的研发和临床试验提供参考。这三个多肽分别为TA、TC和BC，均为通过InsightII软件，根据TACI-BAFF、BCMA-BAFF的相互作用所涉及到的关键的氨基酸残基，结合分子对接法，而设计得到。 本课题主要的研究方法为，采用菌液PCR、重组质粒双酶切法和基因测序验证重组子TACI-Fc和BCMA-Fc的正确性。之后转入原核表达宿主细胞中，进行大量表达，最后通过蛋白A柱进行纯化融合蛋白。通过间接ELISA试验考察所得融合蛋白与BAFF的结合活性，最后通过竞争ELISA试验研究多肽对BAFF-TACI和BAFF-BCMA结合的抑制作用。具体研究成果如下： （1）验证了实验室保存的pET28a-TACI-Fc和pET30a-BCMA-Fc重组子的正确性，并且成功进行了这两个融合蛋白的原核系统可溶性表达。 （2）通过间接ELISA试验考察了所得融合蛋白与BAFF的结合活性，并且确定了BAFF-TACI-Fc和BAFF-BCMA-Fc结合的最佳饱和浓度，分别为5ng/μL和30ng/μL。 （3）竞争ELISA试验证明三个多肽TA、TC和BC都对BAFF-TACI和BAFF-BCMA结合有一定的抑制作用，并且不同多肽两两混合之后增强了抑制作用，抑制率随着随着多肽的浓度的增加而增大。当多肽的浓度为100ng/μL时，TA、TC、BC、TA+BC、TA+TC和BC+TC对BCMA-BAFF的抑制率分别为42.2%、44.8%、48.6%、46.4%、46.6%和56.3%；对TACI-BAFF的抑制率分别为30.8%、40.9%、40.3%、34.6%、43.9%和44.6%。为多肽的进一步研究打下了良好基础。
【关键词】：BAFF 多肽 BAFF拮抗剂
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 第一章 文献综述8-18
• 1.1 BAFF的结构和分布8
• 1.2 BAFF受体8-11
• 1.2.1 BAFF-R8-9
• 1.2.2 TACI9-10
• 1.2.3 BCMA10-11
• 1.3 BAFF的生物功能11-13
• 1.3.1 对B细胞的作用11-12
• 1.3.2 对T细胞的作用12-13
• 1.4 BAFF相关疾病13-15
• 1.4.1 免疫缺陷病13
• 1.4.2 自身免疫性疾病13-14
• 1.4.3 过敏性疾病14
• 1.4.4 感染14-15
• 1.4.5 恶性肿瘤15
• 1.5 BAFF拮抗剂15-17
• 1.5.1 抗BAFF抗体15-16
• 1.5.2 BAFF受体抑制剂16-17
• 1.5.3 BAFF相关免疫毒素17
• 1.6 总结与展望17-18
• 第二章 材料、试剂与仪器18-23
• 2.1 实验材料18-19
• 2.2 实验试剂与溶液的配制19-22
• 2.2.1 实验试剂19-20
• 2.2.2 实验室溶液配制20-22
• 2.3 实验仪器22-23
• 第三章 TACI-Fc和BCMA-Fc融合蛋白的表达、纯化和结合活性鉴定23-44
• 引言23
• 3.1 实验方法23-28
• 3.1.1 TACI-Fc和BCMA-Fc重组子的验证23-25
• 3.1.2 TACI-Fc和BCMA-Fc重组蛋白的诱导和表达25-28
• 3.2 实验结果与讨论28-43
• 3.2.1 TACI-Fc重组子的验证28-30
• 3.2.2 TACI-Fc融合蛋白的诱导和表达条件的优化30-31
• 3.2.3 TACI-Fc融合蛋白的大量表达和纯化31-33
• 3.2.4 TACI-Fc融合蛋白与BAFF结合活力的测定33-36
• 3.2.5 BCMA-Fc重组子的验证36-37
• 3.2.6 BCMA-Fc融合蛋白的诱导和表达条件的优化37-38
• 3.2.7 BCMA-Fc融合蛋白的大量表达38-39
• 3.2.8 BCMA-Fc融合蛋白与BAFF结合活力的测定39-43
• 3.2.9 蛋白浓度的测定43
• 3.3 本章小结43-44
• 第四章 拮抗肽对TACI-BAFF和BCMA-BAFF结合的抑制作用44-68
• 引言44
• 4.1 实验方法44-47
• 4.1.1 多肽的获得44-45
• 4.1.2 多肽的处理45-46
• 4.1.3 竞争ELISA46-47
• 4.2 实验结果与讨论47-67
• 4.2.1 多肽的处理47-48
• 4.2.2 多肽对BAFF-TACI结合的抑制作用48-58
• 4.2.3 多肽对BCMA-BAFF结合的抑制作用58-67
• 4.3 本章小结67-68
• 第五章 结论与展望68-70
• 5.1 结论68-69
• 5.2 展望69-70
• 参考文献70-75
• 发表论文和参加科研情况说明75-76
• 致谢76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 ;Generation and Characterization of C305,a Murine Neutralizing scFv Antibody That Can Inhibit BLyS Binding to Its Receptor BCMA[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2005年06期

2 ;Diphtheria Toxin/Human B-Cell Activating Factor Fusion Protein Kills Human Acute Lymphoblastic Leukemia BALL-1 Cells: An Experimental Study[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年03期

本文编号：592474