大鼠正中隆起Nestin，Sox2和BrdU阳性细胞的分布及形态学研究

发布时间：2017-07-31 18:02

  本文关键词：大鼠正中隆起Nestin，Sox2和BrdU阳性细胞的分布及形态学研究

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【摘要】：目的：观察正中隆起的Nestin, Sox2, BudU阳性细胞的分布及形态。 方法：选择健康SD大鼠30只，体重180-200g，随机分成两组：①正常组（n=15）；②模型组（n=15）：注射BrdU。 1BrdU标记实验动物模型制备：分别于16:00和18:00，按照50mg/kg剂量对模型组的实验动物进行腹腔注射BrdU生理盐水溶液，连续给药三天，制备BrdU模型。 2取材和标本制备：正常组实验动物9只，常规麻醉，经心灌注，取材，后固定，浸蜡包埋，选取含正中隆起部分，石蜡切片，厚度为5μm，分别经甲苯胺蓝染色、Nestin和Sox2免疫组织化学染色；BrdU模型实验动物9只，常规麻醉，经心灌注，取材，固定，浸蜡包埋，，选取含正中隆起部分，石蜡切片，厚度为5μm，进行BrdU免疫组织化学染色，封片后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。 3Nestin, Sox2免疫荧光化学双标染色步骤:正常组实验动物6只，常规麻醉，经心灌注，取材，后固定，蔗糖浸泡后选取含正中隆起部分，冰冻切片，厚度为8μm，经Nestin, Sox2免疫荧光化学双标染色，50%甘油封片后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。 4BrdU, Sox2免疫荧光化学双标染色：BrdU模型动物6只，常规麻醉，经心灌注，取材，后固定，蔗糖浸泡后选取含正中隆起部分，冰冻切片，厚度为8μm，经BrdU, Sox2免疫荧光化学双标染色，50%甘油封片后Olympus BX-UCB显微照相系统观察照像。 5统计学处理：照片的阳性细胞采用专业图像分析软件Image-ProPlus6.0对阳性细胞和总细胞进行计数，计算阳性率。 结果： 1甲苯胺蓝染色 正常组大鼠下丘脑的冠状切片显示正中隆起位于第三脑室的基底部。甲苯胺蓝染色后，细胞核呈蓝色，尼氏体呈蓝紫色，正中隆起被分为五个层次：室管膜层、室管膜下层、纤维层、网状层和栅状层。正中隆起及第三脑室侧壁的室管膜细胞分为四种不同形态。正中隆起的腹侧被腺垂体结节部覆盖，ME含有大量毛细血管。 2免疫组织化学染色 2.3Nestin染色：ME中央部2/3的室管膜层和室管膜下层，胞核较大，胞质为Nestin强阳性；ME两侧的室管膜层和室管膜下层，胞核较小，胞质为Nestin弱阳性；ME纤维层和网状层有散在分布的粗大Nestin阳性突起，Nestin阳性细胞胞核较大，散在分布；在栅状层偶见Nestin阳性细胞，胞核较大。第三脑室单侧侧壁Nestin阳性细胞表达率：6.01±5.30%。ME的Nestin阳性细胞表达率：42.45±3.42%。 2.2Sox2染色：ME室管膜层和室管膜下层的Sox2免疫阳性细胞紧密排列，ME纤维层和网状层，Sox2阳性细胞较稀疏。第三脑室单侧侧壁Sox2阳性细胞表达率：32.77±7.24%。ME的Sox2阳性细胞表达率：48.30±5.66%。 2.3BrdU染色：BrdU阳性细胞在ME的纤维层和网状层零星分布，少数位于栅状层，偶见于室管膜下层。第三脑室单侧侧壁BrdU阳性细胞表达率：0.12±0.08%。ME的BrdU阳性细胞表达率：4.17±0.38%。 3免疫荧光化学染色 3.1Nestin, Sox2双标免疫荧光化学染色：Nestin阳性胞浆呈绿色荧光，Sox2阳性胞核呈红色荧光。Nestin和Sox2双标阳性细胞在ME中央部2/3的室管膜层和室管膜下层密集分布，在ME纤维层和网状层分布稀疏。 3.2BrdU, Sox2双标免疫荧光化学染色：BrdU阳性胞核呈绿色荧光，Sox2阳性胞核呈红色荧光。BrdU和Sox2双标阳性细胞，细胞核颜色叠加成为黄绿色，在ME纤维层和网状层零星分布，少数位于栅状层，偶见于室管膜下层。 结论： 1Nestin阳性细胞，在ME的室管膜层和室管膜下层分布密集，在纤维层和网状层分布稀疏。 2Sox2阳性细胞，在ME室管膜层和室管膜下层分布密集，在纤维层和网状层分布稀疏；BrdU阳性细胞在纤维层和网状层零星分布。 3Nestin和Sox2双标细胞在ME的室管膜层和室管膜下层分布密集，在纤维层和网状层分布稀疏；BrdU和Sox2双标细胞在ME的纤维层和网状层零星分布。
【关键词】：正中隆起 神经干细胞 伸长细胞 Nestin Sox2 BrdU
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-19
• 结果19-23
• 附图23-37
• 附表37-38
• 讨论38-40
• 结论40-41
• 参考文献41-43
• 综述 正中隆起伸长细胞的屏障功能43-56
• 参考文献51-56
• 致谢56-57
• 个人简历57

【参考文献】

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1 杨天祝,贾漪涛,马常升,曹翠丽,李学平,葛莉;大鼠室周器官的形态学观察[J];河北医科大学学报;2002年03期

2 王周南;何泽涌;;伸长细胞(综述)[J];山西医学院学报;1986年02期

3 刘梅;曹翠丽;马常升;王丽梅;王荣耕;;实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠正中隆起室管膜细胞的变化及意义[J];山东医药;2012年35期

本文编号：600398