短期冻存兔骨髓间充质干细胞对其增殖及成骨分化潜能的影响

发布时间：2017-08-01 09:06

  本文关键词：短期冻存兔骨髓间充质干细胞对其增殖及成骨分化潜能的影响

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【摘要】：目的探讨短期冻存对兔BMSCs的增殖、生物特征及成骨能力的影响，为进一步研究作基础。方法第5代兔BMSCs冻存，30d后复苏、体外培养至第10代，，设相同代数未冻存的BMSCs为对照组。MTT、细胞周期、细胞表面标志及成骨诱导分化后ALP含量、Ⅰ型胶原及钙结节染色作为其增殖、生物特征及成骨能力的评价指标。结果冻存后BMSCs存活率为（84.38±3.78）%，生长潜伏期延长，传代后逐渐恢复；增殖指数和G1期细胞所占比例分别为（42.9±3.4）%、（57.0±3.4）%，细胞表面标志CD44阳性率为（93.62±1.05）%，不表达CD45；成骨诱导第7、14dALP含量（U/gprot）分别为6.73±1.92、15.99±4.36，第14、21天，Ⅰ型胶原、钙结节茜素红染色阳性；以上结果与未冻存组相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论短期冻存对兔BMSCs增殖、生物特征及成骨分化潜能无明显影响，冻存后可继续进一步研究。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 冻存 增殖 生物特性 成骨分化
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 目录3-6
• 中文摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 英汉缩略词对照表9-11
• 前言11-12
• 1 材料与方法12-32
• 1.1 实验动物12
• 1.2 主要实验试剂及材料12-14
• 1.2.1 主要试验试剂12-14
• 1.2.2 主要试验耗材14
• 1.3 主要实验仪器14-15
• 1.4 实验方法15-32
• 1.4.1 主要液体配制15-17
• 1.4.2 兔 BMSCs 原代分离、培养17-18
• 1.4.3 兔 BMSCs 传代培养18
• 1.4.4 兔 BMSCs 的冷冻保存18-19
• 1.4.5 兔 BMSCs 复苏19
• 1.4.6 复苏细胞的活性检测19
• 1.4.7 细胞形态学观察19-20
• 1.4.8 MTT 比色法绘制生长曲线20
• 1.4.9 细胞周期检测20
• 1.4.10 兔 BMSCs 表型检测20-21
• 1.4.11 向成骨细胞分化能力的检测21-24
• 1.4.11.1 碱性磷酸酶（ ALP ）含量检测21-22
• 1.4.11.2 Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色（SP 法）22-23
• 1.4.11.3 钙结节茜素红染色23-24
• 1.4.12 向成骨细胞分化相关调控因子的检测24-31
• 1.4.13 观察指标31
• 1.4.14 统计学分析31-32
• 2 结果32-42
• 2.1 BMSCs 的培养情况32-33
• 2.2 BMSCs 存活率及生长曲线33-34
• 2.3 BMSCs 表面抗原表达情况34-36
• 2.4 BMSCs 细胞周期检测36-37
• 2.5 ALP 表达情况37-38
• 2.6 Ⅰ型胶原免疫组织化学染色38-39
• 2.7 钙结节茜素红染色39-40
• 2.8 成骨细胞分化相关调控因子的检测40-42
• 3 讨论42-52
• 3.1 BMSCs 的概况及分离培养42-44
• 3.2 BMSCs 的冻存、复苏44-45
• 3.3 短期冻存后 BMSCs 的生物特性45-48
• 3.4 短期冻存后 BMSCs 向成骨细胞分化的能力48-50
• 3.5 成骨细胞分化相关调控因子的检测50-52
• 4 结论52-53
• 综述53-62
• 参考文献62-74
• 攻读学位期间发表的学术论文目录74-75
• 致谢75

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 陈小伍;方驰华;刘胜军;戎祯祥;;短期冻存对大鼠骨髓基质干细胞的影响[J];广东医学;2006年02期

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本文编号：603451