稳定表达SAV细胞的建立及其相互作用蛋白的筛选

发布时间：2017-08-01 09:12

  本文关键词：稳定表达SAV细胞的建立及其相互作用蛋白的筛选

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【摘要】：目的建立能稳定表达SAV(Salrador Homolog)的人胚胎肾细胞HEK293细胞池并从中纯化出SAV相互作用蛋白复合物。方法从人胚胎肾细胞HEK293中提取RNA,RT-PCR扩增得到SAV基因片断,构建表达质粒pBabe-SBP-FLAG-SAV。将pBabe-SBP-FLAG-SAV质粒和病毒包装质粒共同转染HEK293T细胞来产生病毒,收获病毒后感染HEK293细胞。通过嘌呤霉素筛选直至没有细胞死亡并用Western-blot验证表达情况。用链酶亲和素beads从该稳定细胞池中纯化SAV相互作用蛋白并通过银染检测。结果 pBabe-SBP-FLAG-SAV真核表达载体构建成功,包装病毒感染HEK293后通过Western-blot检测可见SAV蛋白的表达,FLAG beads和链酶亲和素beads免疫沉淀进一步证明了该融合蛋白表达的正确性。链酶亲和素纯化出的SAV相互作用蛋白复合物在银染时可见。结论成功构建了pBabe-SBP-FLAG-SAV真核表达载体及稳定表达细胞池,纯化得到SAV相互作用蛋白复合物。为阐明这些蛋白复合体在Hippo信号通路中的作用提供了可靠信息。
【作者单位】： 吉林大学第二医院药品管理部;哈尔滨医科大学附属第一医院药剂部;吉林大学药学院实验药理与毒理学教研室;
【关键词】： SAV HEK 稳定细胞池 相互作用蛋白
【分类号】：R363
【正文快照】： 近年,关于调控细胞增殖和凋亡的Hippo信号通路的研究备受瞩目[1-2]。在哺乳动物细胞中,由Mst1/2-WW45(LATS1/2-Mob1(YAP/TAZ组成的Hippo信号通路与果蝇中高度同源[1]。自从1995年许田发现Hippo信号通路第一个成员wts以来[3],哺乳动物细胞中Hippo信号通路的研究取得了巨大进步

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本文编号：603506