胶原诱导关节炎（CIA）恒河猴模型及药物治疗

发布时间：2017-08-01 15:25

  本文关键词：胶原诱导关节炎（CIA）恒河猴模型及药物治疗

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【摘要】：本项研究主要分为两个部分：第一部分，用牛II型胶原诱导恒河猴关节炎模型的建立；第二部分，采用已上市且在临床上已验证具有治疗类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）作用的药物西乐葆（CELEBREX，塞来昔布胶囊）和益赛普（ETANERCEP，注射用重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白）来验证胶原诱导恒河猴关节炎模型是否可用于RA治疗药物的评价。 第一部分牛II型胶原诱导恒河猴关节炎模型的建立 目的：采用牛II型胶原诱导建立恒河猴关节炎模型。方法：采用完全弗氏佐剂制备的牛II型胶原悬浊液免疫6只恒河猴，每周测定动物的血液学和生化学指标，采用半定量评分系统观察动物的体重及行为学状态并评分，X线检查骨关节病变程度。结果：注射胶原后12-15天（D12-D15），恒河猴均出现关节炎症表现，背部注射部位皮肤溃烂出血，临床表现为采食速度减慢，体重下降率超过14%或者呈增长缓慢、双足行为异常。动物表现分为：①2/6只动物在免疫后第一周到第二周发展成急性活动期关节炎（全身临床评分3-4分），病程发展迅速，行动迟缓且不喜攀爬继而指关节红肿，血清中CRP、WBC、NEUT、MONO和抗II型胶原IgG水平显著或极显著升高(P≤0.05或P≤0.01)，HGB、ALB显著降低，D26-D40关节严重肿胀，动物食欲废绝；②4/6只动物属于慢性活动期，病程呈慢性进行性发展，全身临床评分维持2-3分。在免疫后70天观察期间，CRP、WBC、NEUT、 MONO轻度升高，血清抗II型胶原IgG水平显著升高(P≤0.05)。Ｘ线征象与临床RA相似，双手和双足掌指关节（MCP）/跖趾关节和近段指关节（PIP）/近段趾关节出现初期或中期病变特征，表现为受累关节周围软组织肿胀、局限性骨质疏松、关节间隙狭窄和骨质侵蚀以关节边缘骨质侵蚀最具有特异性，病变以手或足远端、近端指间关节为主，其中双足关节破坏先于双手关节。结论：胶原诱导恒河猴关节炎的发病机制和表现与临床相似。 第二部分西乐葆、益赛普对胶原诱导恒河猴关节炎的治疗。 目的：验证西乐葆、益赛普对胶原诱导恒河猴关节炎的治疗作用。 方法：对3只RA模型动物（1/3只急性活动期动物，2/3只慢性活动期动物）在免疫后第四周开始用西乐葆（9mg kg-1，1次/天，po.）治疗；对5只RA模型动物在胶原免疫后D26皮下注射益赛普（1mg kg-1，2次/周，sc.）。6只动物作为模型对照组观察，免疫后每周检测动物的生化学指标的变化，，采用半定量评分系统动态监测动物的体重及行为状态并评分；给药前和给药结束分别检测：X线检查骨关节病变程度，血清细胞因子TNF-α、IFN-γ的变化，血清中抗牛II型胶原IgG的变化。 结果：西乐葆（9mg kg-1）连续给药30天治疗3只活动性RA猴，对炎症控制起效较慢，连续给药D16-D30可抑制CRP、WBC、NEUT升高，同时缓解ALB、HGB降低；X线表明可使受累关节局部软组织肿胀缓解（3/3），但对骨保护方面的作用不明显，特别是双足骨破坏继续发展（3/3）。 益赛普（1mg kg-1）治疗5只急性活动期RA猴，在给药两周后（共四针），动物体重出现较大的反弹，生化指标逐渐恢复；在给药D20（第5针），4/5只动物由于免疫低下继发感染出现炎性细胞升高，停药后给予西乐葆（9mg kg-1，1次/天，治疗13天），动物体重呈增长趋势（临床评分降低至1~2分），同时MONO呈降低趋势，但WBC、NEUT持续保持高水平。与给药前四肢关节的X光平片比较，动物关节软组织肿胀改善明显，5/5只动物的关节面骨质损伤发展不明显。 结论：西乐葆可以控制胶原诱导恒河猴关节炎的炎症发展，但其对关节面的骨损害没有保护作用且疗效的产生较为缓慢，关节炎症状的明显改善出现在给药一个月左右。益赛普可以控制中度或重度的关节炎症状，对关节面的损害有减缓作用，疗效产生的时程短，给药两周后动物的症状得到了明显改善。
【关键词】：胶原诱导关节炎 恒河猴 生化指标X光平片 西乐葆 益赛普
【学位授予单位】：四川抗菌素工业研究所
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R684.3;R-332
【目录】：

• 摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-17
• 一、牛 II 型胶原诱导恒河猴关节炎的研究17-31
• 1 引言17
• 2 材料17-19
• 2.1 动物17-18
• 2.2 试剂18
• 2.2.1 试剂一18
• 2.2.2 试剂二18
• 2.2.3 试剂三18
• 2.2.4 ELISA 试剂盒18
• 2.3 其他材料18-19
• 2.4 仪器19
• 3 方法19-22
• 3.1 悬浊液准备与动物免疫19
• 3.2 免疫后的临床评分19-20
• 3.3 血液学与血清生化测定20
• 3.4 关节组织病理学检查20
• 3.5 血清抗牛 II 型胶原 IgG 测定20-22
• 4 结果22-29
• 4.1 免疫后体重与临床相关性评分分析22-25
• 4.2 血生化指标分析25-26
• 4.3 病理学检查结果26-27
• 4.4 X 线照片诊断27-28
• 4.5 抗牛 II 型胶原 IgG 测定结果28-29
• 5 讨论29-31
• 二、西乐葆、益赛普对 CIA 恒河猴模型临床特征改变的试验研究31-48
• 1 引言31-32
• 2 材料32-33
• 2.1 动物32
• 2.2 药物32
• 2.3 其他试剂32-33
• 2.4 仪器33
• 3 方法33-37
• 3.1 模型建立33-34
• 3.1.1 制备和免疫方法33
• 3.1.2 致炎后的动物入选标准33-34
• 3.2 给药方案34
• 3.3 各种指标的检查与频率34-36
• 3.3.1 临床症状的观察34
• 3.3.2 注射部位的观察34-35
• 3.3.3 体重测定35
• 3.3.4 摄食量测定35
• 3.3.5 四肢关节检查35
• 3.3.6 X 线照片诊断35-36
• 3.4 细胞因子试验36-37
• 3.4.1 血清 TNF-α含量测定36-37
• 3.4.2 血清 IFN-γ含量测定37
• 3.5 数据处理37
• 4 结果37-47
• 4.1 体重与临床评分相关性分析37-40
• 4.2 与炎症相关的血液学指标分析40-42
• 4.3 CRP 水平变化42-43
• 4.4 ALB 与 HGB 水平的变化43-44
• 4.5 X 线平片诊断结果44-45
• 4.6 西乐葆、益赛普对 IFN-γ、 TNF-α和抗牛 II 型胶原 IgG 的影响45-47
• 5 讨论47-48
• 结论48-49
• 试验创新性49-50
• 附录：实验原始数据列表50-51
• 附图51-53
• 参考文献53-55
• 致谢55-56
• 作者在读期间科研成果简介56-57
• 综述57-66
• 参考文献64-66
• 中英文缩略词66

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