测量和分析纤毛运动活动的新方法

发布时间：2017-08-03 02:13

  本文关键词：测量和分析纤毛运动活动的新方法

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【摘要】：气管中纤毛的运动活动（CBA）通过清除呼吸道中的痰液和病原体扮演着重要的作用。因为纤毛运动活动极其复杂以至于不能仅仅通过频率来描述其特征，所以我们用激光共聚焦显微镜的线扫模式记录纤毛运动活动并且定义了六个参数来反应纤毛运动活动。当测量纤毛运动的小鼠纤毛细胞时，这六个参数的值都大于零。 接下来我们用10微摩尔腺嘌呤核苷三磷酸刺激细胞，同时记录细胞内钙水平和纤毛运动活动。我们发现细胞内钙水平先增高，紧接着纤毛运动活动增强。在这六个参数之中，频率、幅度和积分面积显著增高，然而上升时间、下降时间和半数衰变时间明显下降。这些结果表明六个参数适合评估纤毛运动活动而且升高的细胞内钙水平可能增强纤毛运动活动。 接下来我们用机械刺激纤毛尖端，并且用我们建立的方法观察各个参数的变化。结果表明机械刺激介导的细胞内钙水平和纤毛运动活动的变化不仅和腺嘌呤核苷三磷酸引导的变化相似，而且这种变化可以被10微摩尔的钙离子螯合剂BAPTA-AM处理十分钟阻断掉。此外，在无钙条件下，，我们检测到相同的阻断效果，当向浴槽中加入2毫摩尔的钙离子后可以重新恢复细胞内钙水平的增加和纤毛运动活动的增强。 综上所述，我们提供了一种能够同时测量和分析纤毛运动活动并监控细胞内钙水平的方法。并且用这个方法证明了当机械刺激纤毛尖端时，细胞外钙离子的进入使细胞内钙水平升高，转而促发纤毛运动活动的增强。
【关键词】：纤毛细胞 纤毛运动活动 细胞内钙 机械刺激
【学位授予单位】：中南民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第一章 绪论9-18
• 1.1 纤毛概述9-16
• 1.1.1 纤毛的定义9-10
• 1.1.2 纤毛的结构与功能10-12
• 1.1.3 测量和分析纤毛运动的方法12-15
• 1.1.4 钙对气管纤毛运动的调控机制15-16
• 1.2 本文构想16-18
• 1.2.1 研究目的16-17
• 1.2.2 研究内容17-18
• 第二章 测量和分析纤毛运动的新方法18-24
• 2.1 实验材料18
• 2.1.1 Balb/C 小鼠18
• 2.1.2 主要仪器和试剂18
• 2.1.3 溶液配制18
• 2.2 实验方法18-20
• 2.2.1 纤毛细胞的分离18-19
• 2.2.2 纤毛运动活动的测量和分析19-20
• 2.3 实验结果20-23
• 2.3.1 激光共聚焦线扫描和纤毛运动活动的计算20-22
• 2.3.2 纤毛运动活动的记录与分析22-23
• 2.4 小结23-24
• 第三章 纤毛运动活动与细胞内钙同时记录24-30
• 3.1 实验材料24-25
• 3.1.1 Balb/C 小鼠24
• 3.1.2 主要仪器和试剂24
• 3.1.3 生理溶液24-25
• 3.2 实验方法25-26
• 3.2.1 纤毛细胞的分离25
• 3.2.2 纤毛运动活动的测量和分析25
• 3.2.3 细胞内钙的测量25
• 3.2.4 ATP 和 Ionomycin 的给药与 patch 实验25-26
• 3.3 实验结果26-29
• 3.3.1 ATP 介导的细胞内钙升高和纤毛运动水平的增强26-28
• 3.3.2 纤毛运动频率的增加导致幅度的增加28-29
• 3.4 小结29-30
• 第四章 机械刺激增加细胞内钙水平增强纤毛运动活动30-36
• 4.1 实验材料30-31
• 4.1.1 Balb/C 小鼠30
• 4.1.2 主要仪器和试剂30
• 4.1.3 生理溶液30-31
• 4.2 实验方法31-33
• 4.2.1 纤毛细胞的分离31
• 4.2.2 纤毛运动活动的测量和分析31
• 4.2.3 细胞内钙的测量31-32
• 4.2.4 机械刺激操作过程32-33
• 4.3 实验结果33-35
• 4.3.1 机械刺激增加细胞内钙水平增强纤毛运动活动33-34
• 4.3.2 细胞内钙水平的增加调控机械刺激介导纤毛运动活动增强34-35
• 4.3.3 机械刺激通过钙内流使纤毛运动活动增强35
• 4.4 小结35-36
• 结果与讨论36-38
• 参考文献38-42
• 致谢42-43
• 附录 研究生期间发表的文章43

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 邹霞;李筠;周建峰;;斑马鱼胚胎左右不对称发育的研究现状与展望[J];山东农业科学;2013年10期

2 刘书霞;耿轶钊;张辉;纪青;;驱动蛋白的结构与功能[J];生命科学研究;2013年06期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 柳江燕;HOXA1基因突变与先天性心脏病关系的研究[D];兰州大学;2012年

2 常丽贤;1、第一部分 DNAH2对范可尼贫血途径的作用研究 2、第二部分 先天性骨髓衰竭性疾病诊断试剂盒的设计和初步验证[D];北京协和医学院;2013年

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1 韩康;杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白IFT88基因的克隆及功能分析[D];郑州大学;2013年

2 刘聪辉;鲆鲽鱼Nodal信号途径相关基因的克隆与胚胎发育早期表达分析[D];中国海洋大学;2013年

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4 王雪松;FGF-10和NF-κBp65在变应性鼻炎鼻黏膜中的表达及相关性研究[D];山西医科大学;2013年

本文编号：612199