粉尘螨过敏原脂肪酶的表达、纯化及生物信息学分析

发布时间：2017-08-03 12:12

  本文关键词：粉尘螨过敏原脂肪酶的表达、纯化及生物信息学分析

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【摘要】：为克隆原核表达并纯化出粉尘螨过敏原脂肪酶蛋白,鉴定其免疫学活性,并分析其分子特征.通过重组合成粉尘螨新过敏原脂肪酶基因,与p ET-28a载体连接后转化大肠埃希菌E.coli Top10,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组新过敏原脂肪酶蛋白;经镍柱亲和层析纯化出粉尘螨重组脂肪酶蛋白,用Western Blot、ELISA方法检测其免疫原性.用生物信息学软件预测其理化性质、二级结构,并构建分子进化树.成功表达纯化出高纯度的粉尘螨重组脂肪酶蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示表达重组产物分子质量约为40 k Da,与理论值一致,纯化后的表达产物经Western blot印迹检测有明显条带显示.信息学分析显示蛋白二级结构由α螺旋(16.38%)、延伸主链(18.93%)、无规则卷曲(64.69%)组成.成功原核表达出粉尘螨过敏原脂肪酶蛋白,并纯化获得较高纯度及较强免疫学活性的重组脂肪酶蛋白,为尘螨过敏性疾病的特异性诊断和免疫治疗奠定理论基础.
【作者单位】： 深圳大学过敏反应与免疫学研究所;南昌大学医学院免疫学教研室;
【关键词】： 粉尘螨 过敏原 重组脂肪酶 生物信息学分析
【基金】：国家自然科学基金(31328014,31400786) 广东省高等学校国际暨港澳台科技合作创新平台项目(2012gjhz0009) 深圳市科技计划国际科技合作项目(GJHZ20130408174112021) 深圳市科技计划基础研究项目(JCYJ20130329110735981,JCYJ20120613173233810) 深圳市南山区研发项目(KC2012JSYB0003A)资助
【分类号】：R392
【正文快照】： 0引言近年来,过敏性疾病诸如过敏性鼻炎、哮喘等发病率逐年升高,成为全球关注的公众卫生学问题.其中尘螨是室内主要的过敏原,过敏体质者吸人其排泄物与死亡残体后可诱发I型变态反应[1-2],尘螨过敏原是过敏性哮喘的主要诱因,虽然各个国家之间有地域差异,但是在北美、南美、欧洲

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本文编号：614307