川崎病动物模型的建立以及其血浆N末端脑利钠肽前体水平的变化
发布时间：2017-08-03 14:08
本文关键词：川崎病动物模型的建立以及其血浆N末端脑利钠肽前体水平的变化
【摘要】：目的 川崎病(Kawasaki disease，KD)是儿科一种常见的自身免疫性疾病，可引起全身性血管炎，并好发于冠状动脉，从而造成严重的并发症冠状动脉损害（coronary arterial lesions,CAL），是构成儿童后天性心脏病的主要病因之一。目前，临床上对于KD主要根据临床特点，和辅以超声心动图检查予以诊断，缺乏便于早期诊断的特异性生化指标，本课题通过建立动物疾病模型，对其血液相关生化指标进行检测，以期寻找到一种可帮助疾病早期诊断的血液指标。同时，KD的发病机制至今也尚不明确，疾病动物模型的建立也可为进一步探讨KD的发病机制提供研究平台。 方法 第一阶段：本课题采用乳酸杆菌细胞壁提取物（1actobacillus casei cellwall extract,LCWE）作为免疫诱导剂，通过MRS肉汤培养基进行细菌培养获取大量培养物，，并经超声破碎、SDS细胞裂解，以及RNase、DNaseI、胰蛋白酶等处理萃取所需LCWE，最终以细胞壁中肽聚糖的含量作为LCWE的浓度，利用多糖在浓硫酸的作用下水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物(苯酚-硫酸法)，在紫外可见分光光度计波长490nm下检测其吸光度，并结合标准物葡萄糖胺所绘制的标准曲线，计算得到LCWE的样品浓度，然后配制成浓度为1mg/ml的溶液备用。 第二阶段：将80只BALB/C小鼠（4-6周龄）随机分为实验组和对照组，每组各40只，对实验组小鼠采取腹腔注射LCWE（1mg/ml）0.5ml，连续3天，而对照组小鼠则予以生理盐水NS作同样处理。然后于第1、3、5、10、28天对两组小鼠分批进行解剖，每次各组解剖8只，摘取心脏、主动脉等血管组织，对组织标本进行HE染色，观察其病理改变。另外，通过摘眼球法采血留取血液标本0.5-1ml，经离心后，采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA法）测定小鼠血浆N末端脑钠肽前体（N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP）的含量，并对所获得的数据进行统计学分析，比较两组小鼠NT-proBNP浓度的变化是否具有统计学意义（P㩳0.05）。 结果 1、动物组织标本病理变化情况：经腹腔注射LCWE后，实验组小鼠心脏冠状动脉及主动脉等血管周围发生炎性改变的占77.5%（31/40），而对照组小鼠则未有发生类似血管炎症改变现象。 2、实验组小鼠心脏及主动脉标本经HE染色后光镜下检查显示起初仅见有少许中性粒细胞沿着血管内皮聚集，后逐渐增多累及血管壁周围（第1、3天），继之出现大量中性粒细胞、单核巨噬细胞、淋巴细胞以及成纤维细胞的浸润，同时伴有血管内膜增厚（第5天），第10天炎症反应累及血管全层，可见动脉内膜、中膜以及外膜断裂，并伴有大量巨噬细胞浸润和成纤维细胞增生，至28天时，血管周围炎性细胞明显减少，出现明显纤维化，导致动脉血管增厚狭窄。 3、小鼠血浆NT-proBNP的含量变化：两组BALB/C小鼠的血液经离心后，采用ELISA法检测其血浆NT-proBNP浓度，并对两组数据进行t检验，发现实验组小鼠NT-proBNP浓度明显升高，与对照组差异具有统计学意义（P㩳0.05）。同时，结合所得的实验数据，发现实验组小鼠血浆NT-proBNP浓度在疾病发展的急性期（第1~10天）有逐渐升高趋势，至第28天实验组小鼠血浆NT-proBNP浓度水平相对于初期又出现明显下降，而对照组小鼠血浆NT-proBNP浓度水平则未见有明显波动变化。 结论 1.腹腔注射LCWE能够诱导BALB/C小鼠发生血管炎症改变，模仿KD所致的冠状动脉炎症损害，是一种比较可靠的疾病动物模型，可用于进一步的科研实验。 2.采用ELISA法检测KD小鼠动物模型的血浆NT-proBNP浓度，通过t检验发现其浓度相对于对照组有明显升高，差异具有统计学意义（P㩳0.05），提示血浆NT-proBNP浓度变化可能是KD血液中一种特异性变化的生化指标，有望成为临床上帮助KD早期诊断的指标之一。
【关键词】：川崎病 动物模型 N末端脑钠肽前体 诊断
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R725.4
【目录】：
- 目录4-5
- 中英文缩略词表5-6
- 中文摘要6-9
- Abstract9-12
- 前言12-15
- 材料与方法15-22
- 结果22-26
- 讨论26-29
- 结论29
- 不足和展望29-30
- 参考文献30-33
- 附录33-34
- 致谢34-35
- 综述35-40
- 参考文献39-40
【参考文献】
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本文编号：614726
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