Max作用蛋白1-0缺失突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

发布时间：2017-08-04 06:32

  本文关键词：Max作用蛋白1-0缺失突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

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【摘要】：目的:构建Max作用蛋白1-0(Max interacting protein1-0,Mxi1-0)缺失突变体的真核表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况,为研究Mxi1-0细胞内定位与其功能的关系奠定基础。方法:以野生型Mxi1-0真核表达质粒为模板,聚合酶链式反应扩增出5种类型Mxi1-0缺失突变体的基因片段,克隆至增强绿色荧光蛋白真核表达载体,经酶切和测序鉴定后,利用脂质体将重组质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)。Western blot检测融合蛋白的表达,荧光显微镜下观察融合蛋白细胞内定位情况。结果:各种Mxi1-0缺失突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3中得到表达。免疫荧光结果表明,脯氨酸富集结构域(PRD)突变体在细胞质和细胞核中均有分布,与Sin3结合域高度同源结构域(t SID)突变体主要分布于细胞质,在细胞核中有少量分布;PRD-t SID突变体及△PRD突变体分布于细胞质,而△PRD-t SID突变体主要分布于细胞核。结论:成功构建了5种人Mxi1-0缺失突变体的真核表达载体,并初步观察这些突变体在细胞内的定位情况,为探寻Mxi1-0在细胞内定位机制及功能奠定了基础。
【作者单位】： 南京医科大学第二附属医院临床分子基因检测中心;南京医科大学生殖医学国家重点实验室;
【关键词】： 基因表达 Max作用蛋白- 小鼠胚胎成纤维细胞 细胞内定位
【基金】：国家自然科学基金项目(81301822) 南京医科大学科技发展基金重点项目(2012NJMU088)
【分类号】：Q78;R3411
【正文快照】： Max作用蛋白1(Max interacting protein 1,Mxi1)是一个肿瘤抑制基因,参与禽骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(c-Myc)功能调节[1-3]。其碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链(b-HLH-ZIP)结构域和c-Myc竞争结合MYC关联因子X(Max),抵消c-Myc的促转录作用。Mxi1的氨基末端有Sin3结合域(SID),当Mx

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