miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的研究

发布时间：2017-08-06 11:23

  本文关键词：miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的研究

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【摘要】：目的探讨mi RNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的可能性及机制。方法取包皮环切术获得的人正常包皮组织5例,采用0.25%胰蛋白酶-EDTA联合消化法分离表皮和真皮,应用Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化人表皮干细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状况,行β1整合素(integrinβ1,ITGB1)、角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)、CK1、CK10、CK18、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)免疫细胞化学染色鉴定。通过脂质体转染将mi RNA-203模拟物导入人表皮干细胞(实验组),转染对照mi RNA模拟物作为对照组。免疫细胞化学染色法对转染后细胞行ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA单克隆抗体检测鉴定;实时荧光定量RT-PCR检测转染前及转染后72 h的细胞中mi RNA-203、P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA m RNA相对表达量;Western blot法检测P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA蛋白相对表达量;并对mi RNA-203的m RNA表达与P63的m RNA和蛋白表达分别行Pearson相关分析。结果转染前人表皮干细胞CK19、ITGB1阳性表达,转染后CK1、CK10、CK18、CEA阳性表达。实验组转染后细胞mi RNA-203 m RNA相对表达量显著高于转染前(P0.05)。实验组转染后细胞CK1、CK10、CK18、CEA m RNA及蛋白的相对表达量均高于转染前及对照组,而P63、CK19、ITGB1 m RNA及蛋白的相对表达量均低于转染前和对照组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。上述指标对照组与转染前比较差异均无统计学意义(P0.05)。转染前后mi RNA-203的m RNA表达量与P63的m RNA和蛋白相对表达量均成负相关,转染前相关系数分别为—0.91(t=3.862,P=0.042)及—0.96(t=5.971,P=0.009);转染后相关系数分别为—0.92(t=4.283,P=0.031)及—0.95(t=5.842,P=0.011)。结论 mi RNA-203能诱导人表皮干细胞分化为汗腺细胞,其作用可能是通过靶向抑制P63来实现的。
【作者单位】： 南昌大学第一附属医院心血管科;南昌大学第一附属医院烧伤中心;
【关键词】： 表皮干细胞 汗腺细胞 分化 miRNA- P
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30560058;81460293) 江西省科技厅自主设计组装重点项目(20133BBG70026)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： CK10,CK18,and CEA were detected by real-time fluorescence quantitative RT-PCR before transfected and at 72 hoursafter transfected.The protein relative expressions of P63,ITGB1,CK19,CK1,CK10,CK18,and CEA were detectedby Western blot.The m RNA expression o

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