大鼠肝再生过程中caspase-8的表达与时间相关性的研究

发布时间：2017-08-06 14:06

  本文关键词：大鼠肝再生过程中caspase-8的表达与时间相关性的研究

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【摘要】：目的:观察大鼠肝再生过程中caspase-8表达的动态变化，探讨大鼠肝再生过程中细胞凋亡的调控机制。 方法:健康雄性SD大鼠75只，随机分为三组，手术组35只，10%水合氯醛麻醉后行70%肝大部切除；假手术组35只，麻醉后开腹，只翻动肝脏，不做肝切除，正常对照组5只，不做任何处理。手术组和假手术组各自分为七个亚组，即手术完成后分别饲养大鼠3h,6h,24h,3d,7d,11d,14d后处死，切取残肝，称重；正常组直接切取肝脏，称重后取材进行组织学处理，石蜡包埋，切片，并做H-E染色和免疫组织化学染色，观察不同时间点肝细胞形态学变化，检测不同时间点caspase-8的表达及分布。 结果:①肝再生度：大鼠手术后3h肝再生度为0.15±0.02，6h后肝再生度为0.17±0.01，24h后肝再生度为0.21±0.02，3d时肝再生度为0.52±0.04，7d时肝再生度为0.82±0.04，11d时肝再生度为0.83±0.03，14d时肝再生度为0.85±0.02，基本呈现24h时开始上升，7d达高峰并维持在峰值的趋势。 ②肝再生指数：大鼠手术后3h肝再生指数为0.99±0.10，6h后肝再生指数为1.09±0.16，24h后肝再生指数为1.12±0.03，3d时肝再生指数为2.15±0.08，7d时肝再生指数为3.30±0.07，11d时肝再生指数为3.33±0.17，14d时肝再生指数为3.35±0.09，呈现24h时开始上升，3d时升高明显，7d达高峰并维持在峰值的趋势。 ③H-E染色：正常组：肝小叶结构完整，中央静脉周围有放射状排列的肝细胞索，肝血窦明显，肝细胞体积正常，核圆居中，可见核仁、胞质丰富，，汇管区清晰可辨,无明显炎性细胞浸润。假手术组：肝小叶结构完整，中央静脉周围有放射状排列的肝细胞索，肝血窦明显，肝细胞体积正常，核圆居中，可见核仁、胞质丰富，汇管区清晰可辨,未见明显炎细胞浸润，未见明显有丝分裂，与正常组相比无明显变化。正常组和假手术组很少见到肝细胞核分裂相。手术组：肝大部切除3h后可见肝细胞水肿变性较轻，炎性反应不明显，肝血窦稍增宽。术后6h肿胀较前明显，肝血窦进一步增宽，血窦内有较多红细胞，肝索结构稍混乱，肝小叶结构尚完整。术后24h时，可见细胞肿胀较前减轻，血窦间隙较前更进一步增大，其内有较多红细胞，并见炎性细胞浸润，双核肝细胞增多。3d后肝细胞明显增大，肝细胞及胞核大小不一，胞质内可见空泡，汇管区周围可见双核肝细胞及有丝分裂。7d后可见部分细胞出现破裂，血窦间隙模糊，并见炎性细胞浸润，双核肝细胞增多，空泡样变性较前进一步增多。11d后大部分肝板排列较规整，肝细胞及核大小程度不一，双核和有丝分裂的肝细胞数量减少。14d后肝小叶结构完整，肝血窦明显，大部分肝板排列较规整，肝细胞及核大小不一，双核和有丝分裂肝细胞减少。正常对照组和假手术组有丝分裂现象少见，肝70%切除术后有丝分裂肝细胞最多见于3d，术后11d，14d时已少见。 ④免疫组化染色：caspase-8蛋白阳性产物呈棕黄色，主要分布于细胞核,正常对照组阳性细胞百分比为3.51±2.38%，假手术组3h阳性细胞百分比为10.34±5.32%,6h阳性细胞百分比为12.53±4.56%，24h阳性细胞百分比为14.23±4.13%，3d阳性细胞百分比为6.12±4.67%,7d阳性细胞百分比为4.65±3.75%,11d阳性细胞百分比为3.53±4.26%，14d阳性细胞百分比为3.46±5.37%，其中3h,6h,24h,3d,7d组与正常组相比，差异有统计学意义（P0.05）。11d,14d组与正常组相比，差异无统计学意义(P0.05)。手术组3h阳性细胞百分比为26.74±4.59%，6h阳性细胞百分比为30.58±3.58%，24h阳性细胞百分比为32.16±4.36%，3d阳性细胞百分比为53.19±5.43%，7d阳性细胞百分比为70.36±7.69%，11d阳性细胞百分比为50.37±4.38%，14d阳性细胞百分比为45.25±7.67%。手术组7个亚组与正常组相比，差异均有统计学意义（P0.05）。手术组7个亚组与假手术组相比，差异均有统计学意义（P0.05）。手术组caspase-8表达趋势为术后3h阳性细胞表达率开始上升，到7d达到峰值后开始下降，但14d时仍明显高于假手术组和正常对照组。假手术组caspase-8表达趋势呈术后3h表达开始上升，到24h时达峰值并开始下降，11d时恢复到正常水平。 结论：caspase-8是一种细胞凋亡酶，肝大部切除后肝再生中，存在着细胞凋亡的分子调控机制，早期细胞凋亡活性的升高可能为手术应激反应所致，后期持续增高的细胞凋亡则可能与肝再生终止和肝组织结构重塑的调控有关。
【关键词】：肝大部切除 肝再生 caspase-8 细胞凋亡
【学位授予单位】：大理学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 目录3-4
• 缩略词表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-18
• 结果18-25
• 讨论25-29
• 结论29-30
• 参考文献30-33
• 附录33
• 文献综述33-39
• 参考文献37-39
• 致谢39

【共引文献】

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本文编号：630120