人腺病毒南京、湖南、兰州地方株型别鉴定及Hexon全基因序列进化分析

发布时间：2017-08-07 09:29

  本文关键词：人腺病毒南京、湖南、兰州地方株型别鉴定及Hexon全基因序列进化分析

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【摘要】：研究目的： 1.了解2009-2012年南京、湖南及兰州三个地区人腺病毒(human adenovirus, HAdV)的分子流行病学特征,为我国急性呼吸道感染的防治提供理论数据。 2.分离鉴定南京、湖南及兰州三个地区HAdV的阳性株,深入研究腺病毒Hexon基因的结构,分析其分子进化特征,对今后开发研究腺病毒载体、疫苗和抗腺病毒药物提供理论依据。 研究对象和方法： 1.采集南京、湖南(2010年8月-2012年7月)和兰州(2009年12月-2011年11月)三个地区确诊为急性呼吸道感染的门诊和住院患儿鼻炎抽吸物和咽试子标本共3530份。 2.采用普通巢式PCR (Nest-PCR)对这3530份标本进行人腺病毒检测。 3.对549份人腺病毒阳性标本,随机抽选382份分别进行Hela细胞、293T细胞和A549细胞培养分离,并进行HAdV株分离及血清学鉴定。对培养分离成功的39株人腺病毒株进行Hexon基因全序列测定,并与GenBank已知序列进行比对及进化分析。 研究结果： 1.2010-2012年南京市儿童医院人腺病毒检出率为19.6%(253/1291),湖南省儿童医院人腺病毒检出率为14.0%(164/1170),2009-2011年兰州大学第一医院儿科人腺病毒检出率为12.3%(132/1069)。 2.382份腺病毒阳性标本分离腺病毒39株,分别是南京25株,湖南9株,兰州5株,通过PCR及BLAST比对分型显示：腺病毒1型(HAdV-1)6株,HAdV-2型6株,HAdV-3型9株,HAdV-4型1株,HAdV-5型3株,HAdV-7型13株,HAdV-21型1株。 3.39株腺病毒Hexon基因扩增全长约2800bp,编码约900个氨基酸。7个不同的血清型与GenBank中的参考株比对发现,南京HAdV1-5, HAdV-7和HAdV-21不同血清型的同源性为68%-100%,差异性为0%-37.4%；湖南分离株与GenBank中的参考株的同源性为69.2%-100%,差异性为0%-35.5%；兰州的分离株和GenBank参考株对比分析得到核苷酸序列同源性为63.1%-100%,差异性为0%-34.2%。 研究结论： 1.南京、湖南、及兰州三个地区连续两年检测引起婴幼儿急性呼吸道感染的人腺病毒检出率均大于10%(19.6%,14.0%,12.3%),仅次于呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syneytial virus, RSV)。提示人腺病毒是这三个地区儿童呼吸道感染的主要病原体。 2.HAdV感染全年均都可发生,无明显的季节差异性,多感染5岁以下的婴幼儿。2010-2012年南京和湖南、2009-2010年兰州的优势流行株均以HAdV-3和HAdV-7为主,其他少见的血清型HAdV-1, HAdV-2, HAdV-5, HAdV-6, HAdV-11, HAdV-31, HAdV-57有检出,但检出率较低。 3.分离培养人腺病毒株主要以B组HAdV-7型为主,占总分离株的33.3%(13/39), HAdV-3型为辅,21型比较少见,C组主要有HAdV-1, HAdV-2, HAdV-5也较常见,E组的HAdV-4只有1株。 4.39株分离株的Hexon全基因序列与GenBank中的其他序列比较,有较高同源性,但也有个别核苷酸和氨基酸的替换和变异,而这些替换和变异主要存在于中和性抗原Hexon蛋白的保守区,高变区未出现明显的变异,这对今后开发研究人腺病毒载体、疫苗和抗腺病毒药物具有重要的指导意义。 研究结论： 1.南京、湖南、和兰州三个地区连续两年检测引起婴幼儿急性呼吸道感染的相关病毒,人腺病毒检出率均大于10%(19.6%,14.0%,12.3%),仅次于呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syneytial virus, RSV)。提示HAdV是这三个地区儿童呼吸道感染的主要病原体。 2. HAdV感染全年均都可发生,无明显季节分布,多感染3岁以下的婴幼儿。2010-2012两年南京和湖南、2009-2010两年兰州的优势流行株都主要HAdV-3和HAdV-7,其他少见的血清型HAdV-1, HAdV-2, HAdV-5, HAdV-6, HAdV-11, HAdV-31, HAdV-57也都有检出,检出率较低。 3.分离培养人腺病毒株主要以B组的HAdV-7型为主,占总分离株的1/3(13/39),HAdV-3型为辅,21型比较少见,C组主要有HAdV-1, HAdV-2, HAdV-5也较常见,E组的HAdV-4只有1株。 4.39株阳性分离株的Hexon全基因序列与GenBank中的其他序列比较,有较高同源性,但也有个别核苷酸和氨基酸的替换和变异,而这些替换和变异主要存在于中和性抗原Hexon蛋白的保守区,高变区未出现明显的变异,这对今后开发研究人腺病毒载体、疫苗和抗腺病毒药物具有重要的指导意义。
【关键词】：人腺病毒 分离 鉴定 Hexon基因 序列分析
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.1;Q78
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 引言9-20
• 1.1 人腺病毒简介9-14
• 1.2 腺病毒的疾病相关性14-18
• 1.3 Hexon基因特征研究的目的和意义18-20
• 第二章 南京、兰州和湖南地区呼吸道感染腺病毒的检测20-32
• 2.1 实验材料20-21
• 2.2 实验方法21-25
• 2.3 结果25-30
• 2.4 讨论30-32
• 第三章 人腺病毒南京、兰州、湖南株的培养分离鉴定与Hexon基因全长扩增32-47
• 3.1 实验材料32-33
• 3.2 实验方法33-37
• 3.3 结果37-45
• 3.4 讨论45-47
• 第四章 结论47-48
• 4.1 重要结论47
• 4.2 研究展望47-48
• 参考文献48-54
• 在学期间的研究成果54-55
• 致谢55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：633952