RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定

发布时间：2017-08-07 10:27

  本文关键词：RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定

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【摘要】：目的建立有活性的蛋白激酶C受体1(RACK1)过表达和低表达人脐静脉内皮细胞系(HUVEC),为进一步从分子水平研究RACK1在心律失常中的作用机制提供有效手段。方法扩增RACK1基因的全长c DNA序列,并插入p IRES2-EGFP获得过表达载体p IRES2-EGFP-RACK1;同时,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,亚克隆至p Genesil-1得到相应的干扰载体;脂质体转染法将重组体及相应的空质粒分别转染至HUVEC细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,qRT-PCR及Western blot鉴定RACK1 mRNA和蛋白的表达。结果RACK1真核表达载体和RNA干扰载体构建成功。重组体经脂质体法转染HUVEC 48 h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,qRT-PCR及Western blot结果证实了过表达载体和干扰载体能有效的增强和沉默HUVEC细胞中RACK1的表达。结论成功建立了RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系。
【作者单位】： 昆明理工大学生命科学与技术学院分子病毒实验室;解放军昆明总医院检验科;昆明理工大学附属医院云南省第一人民医院检验科;云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学重点实验室;
【关键词】： RACK 过表达 RNA干扰 HUVEC细胞系
【基金】：国家自然科学基金(81260248) 云南省应用基础研究计划(2011FB216,2011FB217)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 有活性的蛋白激酶C受体1(receptor of activatedC kinase 1,RACK1)属于Trp-Asp 40(WD-40)重复蛋白家族,其蛋白序列与G蛋白β亚基具有高度同源性[1]。人的RACK1蛋白是由鸟嘌呤核苷酸结合蛋白βⅡ[guanine nucleotide binding protein(G-protein),be-ta polypeptide 2-like 1,GN，

本文编号：634176