半相合基因效应性T淋巴细胞治疗宫颈癌的小鼠模型研究

发布时间：2017-08-07 17:05

  本文关键词：半相合基因效应性T淋巴细胞治疗宫颈癌的小鼠模型研究

  更多相关文章： 半相合基因 效应性T细胞 宫颈癌 STAT3 P-STAT3 TGF-β1 IFN-γ

【摘要】：目的：本实验以小鼠宫颈癌U14细胞接种C57BL/6雌鼠，建立小鼠宫颈癌移植瘤模型。体外培养C57BL/6雌鼠及半相合基因鼠CB6F1（BABL/C×C57BL/6的杂交子一代，雌性）来源的效应性T淋巴细胞，作用于荷瘤C57BL/6雌鼠，检测其对小鼠瘤组织中的STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表达的影响，观察各组小鼠生存期、GVHR的严重程度。 探讨同源基因或半相合基因效应性T淋巴细胞过继免疫治疗的抗瘤效果，为临床宫颈癌的治疗提供新思路。 方法： 1体外培养小鼠宫颈癌U14细胞，建立C57BL/6小鼠宫颈癌移植瘤模型。 2肿瘤抗原致敏的成熟DC制备：将C57BL/6、CB6F1小鼠骨髓细胞，体外加入rmGM-CSF、rmIL-4、肿瘤抗原裂解液，LPS诱导培养即可得到肿瘤抗原致敏的成熟DC。流式细胞仪分析其CD11c~+、MHC II~+、CD86~+细胞表面分子表达情况。 3效应性T细胞的制备：将C57BL/6、CB6F1小鼠脾细胞，经淋巴分离液分离获得淋巴细胞，尼龙毛柱吸附法收集T淋巴细胞。培养T淋巴细胞2天后，加入肿瘤抗原致敏的成熟DC，培养5天，即可得到效应性T细胞。 4LDH法效应性T细胞体外杀伤实验:将C57BL/6、CB6F1效应性T细胞与宫颈癌U14细胞以50:1、25:1比例混合，混合8小时后，酶标仪检测培养液上清中LDH含量，计算效应性T细胞对肿瘤细胞的杀伤率。 5实验动物分组及治疗：将荷瘤小鼠C57BL/6完全随机分至3组，每组8只。PBS组（A组）：0.5ml PBS鼠尾静脉注射，每5天1次，共注射3次；同源基因效应性T细胞组（B组）：1×10~6个/0.5ml C57BL/6来源效应性T细胞鼠尾静脉注射，每5天1次，共注射3次；半相合基因效应性T细胞组（C组）：1×10~6个/0.5ml CB6F1来源效应性T细胞鼠尾静脉注射，每5天1次，共注射3次。观察各组小鼠生存期。 6免疫组化SP法检测荷瘤小鼠C57BL/6肿瘤组织STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表达情况，采用图像分析软件对免疫组化结果进行分析，用阳性细胞百分比表示其含量。 7HE染色观察各组小鼠瘤组织坏死情况、肝及小肠的病理改变。 结果： 1背部皮下接种1×10~6U14细胞的C57BL/6小鼠，约7天后肉眼可见接种部位肿块直径达0.5cm。 2肿瘤抗原致敏的成熟DC：细胞培养7天后,大部分悬浮生长，，成簇明显，细胞表面可见毛刺状突起。流式细胞仪分析其CD11c~+MHC II~+细胞纯度为92.4%，CD11c~+CD86~+细胞纯度为88.8%。 3LDH法效应性T细胞体外杀伤实验：效靶比为50:1条件下C57BL/6、CB6F1效应性T细胞对U14细胞杀伤率差异无统计学意义（P0.05）；效靶比25:1条件下C57BL/6、CB6F1效应性T细胞对U14细胞杀伤率差异无统计学意义（P0.05）。 4各组老鼠生存期：A组B组、A组C组小鼠生存期差异有统计学意义（P0.05），B组C组小鼠生存期差异无统计学意义（P0.05）。 5C57BL/6小鼠瘤组织免疫组化结果：A组和C组小鼠相比，瘤组织中STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表达量差异有统计学意义（P0.05）。A组和B组小鼠相比，瘤组织中P-STAT3、TGF-β_1表达量差异有统计学意义（P0.05）；瘤组织中STAT3、IFN-γ表达量差异无统计学意义（P0.05）。B组和C组小鼠相比，瘤组织中P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表达量差异有统计学意义（P0.05）；瘤组织中STAT3表达量差异无统计学意义（P0.05）。 6HE染色结果：HE染色观察各种小鼠瘤组织，B组和C组小鼠瘤组织较A组小鼠瘤组织坏死面积大。各组小鼠肝及小肠未见明显病理变化。 结论： 1在体外实验中，CB6F1来源的效应性T细胞与C57BL/6来源的效应性T细胞都能够杀伤小鼠宫颈癌U14细胞，且两者杀伤率未见统计学差异。 2C57BL/6来源的效应性T细胞过继免疫治疗，拮抗TGF-β_1表达，P-STAT3低表达。 3CB6F1来源的效应性T细胞过继免疫治疗，除拮抗TGF-β_1表达、P-STAT3低表达外，STAT3低表达、IFN-γ高表达。 4C57BL/6、CB6F1来源的效应性T细胞作用于荷瘤C57BL/6小鼠未见明显GVHR。 5CB6F1来源的效应性T细胞过继免疫治疗与C57BL/6来源的效应性T细胞过继免疫治疗都能够延长荷瘤C57BL/6小鼠的生存期，且两者生存期未见统计学差异。
【关键词】：半相合基因 效应性T细胞 宫颈癌 STAT3 P-STAT3 TGF-β1 IFN-γ
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R737.33
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10
• 材料与方法10-17
• 结果17-18
• 附图18-27
• 附表27-28
• 讨论28-31
• 结论31-32
• 参考文献32-34
• 综述 肿瘤免疫疗法34-44
• 参考文献40-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王其京;王慧;潘科;;自体CIK、DC-CIK与半合子DC-CIK抗肿瘤免疫反应的比较研究(英文)[J];癌症;2010年07期

2 史蓉华;王昕;赵树铭;;DC瘤苗激活的T淋巴细胞对胃癌细胞的杀伤效应研究[J];中国输血杂志;2010年02期

3 刘婷;华川;;树突状细胞抗肿瘤免疫的研究进展[J];重庆医学;2009年16期

4 王薇;杨先达;;树突细胞源肿瘤疫苗[J];基础医学与临床;2008年08期

5 陈晓丹;宋鑫;;肿瘤-树突状细胞融合疫苗研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2010年09期

6 庞雄昊;周昕熙;陈敏山;;树突状细胞抗肿瘤疫苗的基础及临床研究现状[J];中山大学研究生学刊(自然科学、医学版);2007年02期

7 王峻;蒲骁麟;刘福银;樊卫飞;孟丽娟;杨民;许林;;树突状细胞瘤苗对自体肺癌细胞的杀伤作用[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2008年01期

8 马明瑛;谭晓华;;RNA修饰树突状细胞肿瘤疫苗的研究进展[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2012年03期

9 ;In-vitro activation of cytotoxic T lymphocytes by fusion of mouse hepatocellular carcinoma cells and lymphotactin gene-modified dendritic cells[J];World Journal of Gastroenterology;2007年44期

10 冯钟煦;刘剑勇;;树突状细胞的研究进展[J];医学综述;2012年20期

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 王薇;纳米材料在抗肿瘤免疫治疗中的应用研究[D];北京协和医学院;2011年

2 黄凌;非小细胞肺癌患者MAGE-A3基因多态性/突变及其mRNA表达水平的研究[D];南方医科大学;2011年

3 邸军;慢病毒载体介导人IL-12基因修饰树突状细胞体外抗肺癌作用的研究[D];吉林大学;2009年

4 郭大伟;树突状细胞在肝癌免疫治疗中的应用研究[D];中国医科大学;2009年

5 王雷;白细胞介素27基因转染食管癌患者树突状细胞的抗肿瘤效应及其机理研究[D];河北医科大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 陈晓丹;肺癌细胞与DC融合的特异性肿瘤疫苗治疗肺癌的研究[D];昆明医学院;2011年

2 张志武;CD80-pIRES-SART3真核表达载体的构建[D];华中科技大学;2011年

3 刘婷;Rho家族C-末端肽对树突状细胞交叉递呈的影响及其机制研究[D];第三军医大学;2008年

4 冯钟煦;全细胞抗原致敏DC表型变化在其激活TIL抗肝癌活性的意义研究[D];广西医科大学;2012年

本文编号：635729