人单核细胞系中HIV-1前病毒转录调节新型研究模型的建立

发布时间：2017-08-08 23:04

  本文关键词：人单核细胞系中HIV-1前病毒转录调节新型研究模型的建立

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【摘要】：【目的】抗反转录病毒疗法(ART)能够有效控制人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)的复制,但是不能将其完全清除。至2012年底,全球仍有3 500万HIV-1感染者,同年约160万人死于艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)及其相关疾病。HIV-1感染难以根治的主要原因之一是机体内HIV-1潜伏储存库(Reservoir)的存在。HIV-1潜伏储存库主要由CD4+T细胞和单核巨噬细胞构成,与CD4+T细胞相比,目前研究者对单核巨噬系细胞中HIV-1病毒复制机制尚不明了,且缺乏适宜的研究体系。因此,为探讨单核细胞活化或分化信号对HIV-1复制的影响,我们建立了旨在研究HIV-1前病毒转录调控机制的人单核巨噬细胞系模型。【方法】构建env区域移码突变和nef区域携带EGFP或Nano Luc报告基因的HIV-1 NLn GFP-Kp或NLn Nano Luc-Kp重组病毒,分别感染2种人单核细胞系THP-1或U937细胞。通过有限稀释法制备单克隆细胞系,利用流式细胞术或Nano Luc荧光素酶活性分析检测报告基因的表达。筛选EGFP或Nano Luc阴性表达的细胞克隆,经激活剂佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激后鉴定潜伏感染的细胞克隆。【结果】研究中鉴定了4个HIV-1潜伏感染的细胞克隆。其中2个是表达EGFP的THP-1克隆,2个是以Nano Luc为报告基因的U937克隆。这些克隆在PMA刺激处理后皆有报告基因的表达,而在恒态条件下未检测到报告基因的表达。【结论】成功建立了4个HIV-1潜伏感染的人单核细胞系克隆,该模型有助于理解单核巨噬系细胞的HIV-1病毒复制机制,可能成为进一步研究HIV-1前病毒转录调控机制的有力工具。
【作者单位】： 安徽大学生命科学学院;中国科学院微生物研究所中日联合实验室;Research
【关键词】： 人免疫缺陷病毒 前病毒 转录调控 单核巨噬细胞 细胞模型 再活化
【基金】：日本文部科学省“新生与再生传染性疾病研究基地项目”(No.10005010)
【分类号】：R373;R3416
【正文快照】： 研究报告人单核细胞系中HIV-1前病毒转录调节新型研究模型的建立李阳1,2谷丽君2,3张宇2刘文军4严景华4高福4岩本a吉2,5合田仁2,3石田尚臣2,3*(1.安徽大学生命科学学院安徽合肥230601)(2.中国科学院微生物研究所中日联合实验室北京100101)(3.Research Center for Asian Infect

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本文编号：642399