金属离子对TBt构象及其免疫活性的影响

发布时间：2017-08-13 07:27

  本文关键词：金属离子对TBt构象及其免疫活性的影响

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【摘要】：苦荞属于荞麦栽培种中的一种,由于其特殊的营养价值和药用价值逐渐引起人们长期的关注,苦荞含有丰富的黄酮类化合物、酚类化合物、活性蛋白和其他物质,经常食用可预防和治疗心脑血管疾病,降低“三高”、延缓衰老等,被称为21世纪人类自己能种植的“灵丹妙药”,“长生不老的保健食品”等。但是过敏症也不断报道,食用荞麦后可能会引起一系列的过敏反应,如荨麻疹,哮喘,严重时甚至休克,死亡,这是由于苦荞中的某些过敏成分经食用后所引起的。本研究小组先前已经分离纯化得到分子量为56kDa、34kDa和24kDa的过敏原,用免疫印迹法检测到它们能够同荞麦过敏患者血清中的IgE特异性结合,因此研究低过敏性的苦荞食品是非常必要的。通常,降低过敏蛋白的免疫活性的方法有加热,调节pH,金属离子,物理辐射等等。本实验主要从金属离子与苦荞过敏蛋白TBt的相互作用进行研究。按照前期的方法,本研究首先通过分离、纯化得到纯度95%以上的过敏蛋白TBt。之后配置不同金属离子溶液(Cu2+、Mg2+、Ca2+、Ba2+、Ni2+、AL3+),并与TBt以不同比例进行混合,待相互作用一段时间后进行荧光光谱分析。结果表明,在所选的金属离子中,Cu2+对TBt的结构和活性有较明显的影响。进一步研究结果显示,TBt与Cu2+的结合位点约为1：1,二者主要以静电作用力结合。圆二色光谱探讨了Cu2+对TBt二级结构的影响,发现Cu2+与TBt相互作用后其二级结构未发生明显变化。但Native-PAGE分析和ELISA检测均显示,Cu2+与TBt作用后,可使典型Cupin家族的过敏原TBt由三聚体进一步聚合形成部分六聚体,同时IgG结合能力有所降低。由此得出Cu2+的加入可以使得TBt形成六聚体,部分抗原决定簇被遮, 挡,导致过敏性有所降低。本实验结论为深入研究TBt在植物体内的存在状态以及荞麦中特征微量元素Cu2+等对储藏蛋白的调控提供了理论参考和科学依据。为了检测几种食品中可能存在有微量的苦荞过敏蛋白,本实验采用纯化的TBt免疫动物制备兔和鼠多克隆抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法。实验结果显示,双抗体夹心ELISA试剂盒能够检测到浓度为0.16 μg/mL的TBt,其灵敏性和特异性均比间接性ELISA的检测结果高。
【关键词】：苦荞过敏蛋白 光谱学 Cu~(2+) 致敏性 双抗体夹心ELISA
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要10-11
• ABSTRACT11-13
• 第一章 文献综述13-21
• 1.1 过敏反应13
• 1.2 食物过敏和食物过敏原13-14
• 1.3 荞麦过敏蛋白14-15
• 1.4 过敏治疗以及降低和消除过敏原的方法15-20
• 1.4.1 热处理16
• 1.4.2 pH处理16
• 1.4.3 酶处理16-17
• 1.4.4 高压法17
• 1.4.5 辐射法17
• 1.4.6 金属离子17-18
• 1.4.7 转基因18-20
• 1.5 本研究的目的和意义20-21
• 第二章 金属离子与苦荞过敏蛋白TBt的相互作用21-27
• 2.1 材料与仪器21
• 2.1.1 主要材料与试剂21
• 2.1.2 主要实验设备21
• 2.2 实验方法21-22
• 2.2.1 苦荞过敏蛋白的分离和纯化21
• 2.2.2 荧光光谱分析21-22
• 2.3 结果22-26
• 2.3.1 TBt的纯化22
• 2.3.2 荧光光谱分析结果22-26
• 2.4 讨论26-27
• 第三章 Cu~(2+)对苦荞过敏蛋白TBt的结构和免疫活性的影响27-39
• 3.1 材料和仪器27
• 3.1.1 主要材料与试剂27
• 3.1.2 主要实验设备27
• 3.2 实验方法27-28
• 3.2.1 荧光光谱分析27-28
• 3.2.2 紫外-可见吸收光谱分析28
• 3.2.3 CD光谱分析28
• 3.2.4 Native-PAGE分析28
• 3.2.5 抑制性ELISA和间接性ELISA28
• 3.3 结果28-37
• 3.3.1 荧光光谱分析结果28-29
• 3.3.2 猝灭机理类型29-31
• 3.3.3 结合常数及结合位点数31
• 3.3.4 作用力类型的确定31-32
• 3.3.5 同步荧光光谱32
• 3.3.6 紫外-可见吸收光谱32-34
• 3.3.7 圆二色光谱分析34
• 3.3.8 Native-PAGE分析34-35
• 3.3.9 抑制性ELISA和间接ELISA检测35-37
• 3.4 讨论37-39
• 第四章 双抗体夹心ELISA试剂盒的制备39-45
• 4.1 材料和方法39-40
• 4.1.1 主要实验设备39
• 4.1.2 主要材料、试剂及配置39-40
• 4.2 实验方法40-41
• 4.2.1 苦荞过敏蛋白的分离和纯化40
• 4.2.2 多克隆抗体(鼠抗TBt)的制备40
• 4.2.3 测定抗血清效价40-41
• 4.2.4 双抗体夹心ELISA法41
• 4.2.5 测定最佳检测浓度41
• 4.2.6 食品中苦荞过敏原的检测41
• 4.3 结果41-43
• 4.3.1 测定TBt多克隆抗体效价41
• 4.3.2 双抗体夹心ELISA法测定最低检测苦荞过敏蛋白TBt浓度41-43
• 4.3.3 检测食品中苦荞过敏原成分43
• 4.4 讨论43-45
• 参考文献45-53
• 攻读学位期间取得的研究成果53-54
• 致谢54-55
• 个人简况及联系方式55-56
• 承诺书56-57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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2 姜忠丽;康艳红;辛士刚;;ICP-AES法测定苦荞麦中的矿物元素[J];粮食与饲料工业;2008年08期

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本文编号：666110