云南曼谷并殖吸虫初步调查及其囊蚴形态学观察和遗传标记分析

发布时间：2017-08-13 21:47

  本文关键词：云南曼谷并殖吸虫初步调查及其囊蚴形态学观察和遗传标记分析

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【摘要】：[目的]对云南省曼谷并殖吸虫的地理分布、自然界第二中间宿主的种类、适宜的实验终宿主等进行研究,并对曼谷并殖吸虫的中间宿主种类及感染情况、囊蚴的形态特征进行观察和描述。应用形态学分类和DNA序列分析相结合的方法深入研究曼谷并殖吸虫的虫种独立性及其在并殖科吸虫中的分类学地位；构建基因进化树,阐明云南的曼谷并殖吸虫与其他地区的曼谷并殖吸虫或其它虫种之间的同源性和亲缘关系。 [方法]从云南南部的河口县、马关县和西南部的沧源县、保山市、陇川县、普洱市、景洪市、勐腊县等8个地州市的山涧溪流中采集第二中间宿主溪蟹,分离囊蚴,经形态观察、测量鉴定后,感染实验动物家猫；试剂盒提取囊蚴DNA,利用ITS2和COI引物经PCR体外扩增获得ITS2和COI基因序列,通过GenBank的Blast软件同源性比较,使用MEGA5.0软件构建基因进化树。 [结果]本研究从云南南部和西南部的8个地州市的17条溪流中共采获859只溪蟹,仅在景洪市和勐腊县两地的景洪溪蟹体内检获31个曼谷并殖吸虫囊蚴,其他6个地州市均为阴性。景洪市与勐腊县的曼谷并殖吸虫第二中间宿主—景洪溪蟹的自然感染率分别为2.33%和11.1%；感染度分别为1.2和1.25个。 囊蚴呈圆形或类圆形,具二层囊壁,外壁薄而脆且易破,内壁坚韧,内外壁之间有宽大的空隙。测量25个活体囊蚴,其中有8个具有外层囊壁,其大小平均为(551.25±29.40)μmx(512.66±33.74)μm,外壁厚度平均为(5.67±1.61)μm；17个脱去外壁的囊蚴大小平均为(465.64±23.38)μm×(438.84±23.50)μm,内壁厚度平均为(9.77±2.80)μm。囊蚴最显著的特征是后尾蚴在囊腔内多蜷曲成“U”形,排泄囊抵达肠叉后,后尾蚴与内层囊壁之间有较大的空隙,蚴体在囊腔内活动自如。本实验人工感染2只家猫均未获得成虫。 云南省景洪市与勐腊县的曼谷并殖吸虫囊蚴的ITS2和CO1基因序列通过Blast同源性比较分析表明,其ITS2和COI基因与越南的曼谷并殖吸虫的同源性分别为100%和99%；与泰国的曼谷并殖吸虫的同源性分别为100%和96%；与泰国的哈氏并殖吸虫的同源性分别为99%和95%；与越南的哈氏并殖吸虫的同源性分别为98%和94%；与中国云南是小睾并殖吸虫的同源性分别为98%和93%。ITS2基因进化树显示,本研究的曼谷并殖吸虫与已报道的越南、泰国和云南的曼谷并殖吸虫,越南、泰国的哈氏并殖吸虫,云南的小睾并殖吸虫以100%的置信度构成一大支,独立于其他虫种之外。COI基因进化树显示,本研究的曼谷并殖吸虫与越南和云南的曼谷并殖吸虫均先以65%的置信度聚为两支,再以99%的置信度聚为一支,此支又与泰国的曼谷并殖吸虫以93%的置信度聚为成一支。 [结论]本研究获得的并殖吸虫囊蚴形态,与万雅芳等2011年自勐腊县报道的曼谷并殖吸虫囊蚴形态、以及其他地区报道的曼谷并殖吸虫囊蚴形态一致,符合曼谷并殖吸虫囊蚴的形态学特征。首次证实景洪市也是曼谷并殖吸虫的分布区,但其第二中间宿主的感染率远低于勐腊县；景洪溪蟹是云南曼谷并殖吸虫的第二中间宿主；家猫对曼谷并殖吸虫的易感性差,可能不是其适宜的实验终宿主。DNA序列分析显示,本研究的曼谷并殖吸虫与已报道的云南、越南和泰国的曼谷并殖吸虫同源性极高,为同一虫种；与越南、泰国的哈氏并殖吸虫和云南的小睾并殖吸虫的亲缘关系较近,为近缘虫种。
【关键词】：并殖吸虫 曼谷并殖 囊蚴形态 DNA序列 云南省
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R383.23
【目录】：

• 目录5-6
• 摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 引言11-12
• 材料与方法12-17
• 结果17-44
• 讨论44-51
• 结论51-52
• 参考文献52-56
• 综述56-63
• 参考文献61-63
• 攻读学位期间发表论文情况63-64
• 致谢64

【参考文献】

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本文编号：669113