早孕小鼠子宫内膜中Dicer基因的表达规律

发布时间：2017-08-14 03:27

  本文关键词：早孕小鼠子宫内膜中Dicer基因的表达规律

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【摘要】：目的： 胚胎着床是一个复杂精细的生命过程，是决定妊娠是否成功的重要环节。对其分子机制的研究一直是近年来生殖医学的热点，但目前仍未完全明了。随着对表观遗传学研究的深入，人们发现miRNA分子在建立母胎对话，尤其是着床过程中对子宫容受性及胚泡侵入行为起到了调控作用。miRNAs在体内的成熟需要关键酶核酸内切酶Dicer的参与。已知Dicer基因在生物体内多种生理或病理事件中都发挥了重要作用。本实验将Dicer基因作为研究对象，将其在早孕小鼠子宫内膜中的表达作为研究目标，以期发现Dicer基因在妊娠小鼠着床前后的表达规律，为进一步探讨Dicer基因在胚胎着床过程中的发挥的作用及分子机制提供依据。 方法： 1.动物模型建立及材料收集：建立未孕、真孕、假孕小鼠模型，收集未孕小鼠、真孕小鼠妊娠1d～7d、假孕小鼠妊娠1d～7d各组的子宫内膜组织，于-80℃冰箱冻存备用。 2.总RNA提取及实时荧光定量PCR(RT FQ-PCR)：用Trizol裂解液裂解子宫内膜，提取总RNA，然后逆转录合成cDNA。根据Dicer mRNA的序列设计出其对应的PCR上下游引物，采用β-actin作为内参，检测各组小鼠子宫内膜组织中Dicer mRNA的表达。 3.免疫组织化学：将收集的子宫内膜组织处理后进行石蜡包埋，普通切片，然后进行免疫组化实验，对各组小鼠子宫内膜中Dicer蛋白表达进行定量、定位检测。 4.蛋白提取及Western Blot：用RIPA裂解液提取各组小鼠子宫内膜的总蛋白，BCA定量法测定蛋白浓度。用Western印迹法检测各组小鼠子宫内膜中Dicer蛋白的表达情况。 结果： 1.实时荧光定量PCR结果显示：在真孕组小鼠中，与妊娠1d（记为d1）相比，d4，d5，d6组Dicer mRNA表达明显升高，并于d5达到高峰；假孕组小鼠中，与d1相比，d4，d5，，d6，d7四组Dicer mRNA表达也升高，其趋势与真孕组一致。 2.免疫组化结果显示：在未孕小鼠的子宫内膜中，Dicer在腔上皮、腺上皮和基质细胞中均有少量表达；真孕组小鼠中，小鼠妊娠1d子宫内膜基质开始出现Dicer的强表达，到d4、d5子宫内膜上皮及基质均可见Dicer表达增强，d5表达显著高于d1，且基质细胞表达强于上皮，一直持续到d6、d7子宫内膜发生蜕膜化；假孕组小鼠中，d4至d7Dicer的表达亦明显增强，d4、d5主要表达于基质，d6、d7则主要见于上皮。 3. Western结果显示：在小鼠真孕组中，与d1相比，未孕及d2、d3组Dicer蛋白表达量没有明显改变，d4、d5、d6、d7表达明显升高；假孕组的表达与真孕类似，与d1相比，d4、d5、d6组Dicer蛋白表达也升高。 结论： 1.早孕小鼠妊娠4～6d子宫内膜组织中，Dicer mRNA和蛋白的表达量与第一天比较，均有显著升高。 2.着床前，Dicer蛋白在子宫内膜上皮细胞与基质细胞中均少量表达，着床窗口期与着床后，Dicer表达量增加，且集中在基质细胞中。 3.Dicer在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达存在时间与空间的差异性，提示它可能参与了着床的调控。
【关键词】：胚胎着床 子宫内膜 Dicer
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R321.3
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-15
• 1 材料15-18
• 2 方法18-23
• 3 结果23-29
• 4 讨论29-32
• 全文总结32-33
• 参考文献33-36
• 文献综述：Dicer 在生殖活动中的作用36-42
• 参考文献39-42
• 致谢42-43
• 攻读硕士学位期间发表的论文43-44

【共引文献】

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本文编号：670544