2型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及其相互作用蛋白的纯化

发布时间：2017-08-14 04:04

  本文关键词：2型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及其相互作用蛋白的纯化

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【摘要】：目的构建2型登革病毒(DENV2)非结构蛋白3(NS3)与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化(TAP)法获得与NS3相互作用的蛋白。方法根据DENV2基因序列,设计引物;以DENV2 c DNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表达载体p CI-SF,获得重组表达质粒p CI-NS3-SF;将上述重组质粒通过转染试剂LipofectamineTM2000瞬时转染进入HEK293T细胞,Western blot法验证NS3融合蛋白的表达;通过TAP法分离纯化与NS3相互作用的蛋白。结果成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用TAP系统分离得到与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白。结论串联亲和纯化法可以有效的分离与DENV2 NS3相互作用的细胞蛋白。
【作者单位】： 第四军医大学基础部微生物学教研室;第二炮兵总医院检验科;第四军医大学西京医院输血科;
【关键词】： 登革病毒 NS 串联亲和纯化
【基金】：国家自然科学基金(31370193)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 登革病毒(dengue virus,DENV)是世界范围内流行广泛和危害最为严重的蚊传虫媒病毒。DENV属黄病毒科黄病毒属,主要传播媒介是埃及伊蚊和白纹伊蚊,多发于热带及亚热带地区。DENV的血清型为4种,其中2型登革病毒(DENV2)引起的感染最为严重。DENV感染在临床上主要分为轻型登革热(De

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