Exendin-4对人脐静脉内皮细胞内质网应激损伤的保护作用

发布时间：2017-08-15 13:26

  本文关键词：Exendin-4对人脐静脉内皮细胞内质网应激损伤的保护作用

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【摘要】：目的：研究艾塞那肽（exendin-4，Ex-4）对人脐静脉内皮细胞（humanumbilical vein endothelial cells；HUVECs）内质网应激损伤的保护作用。 方法：含10%胎牛血清的RPMI1640培养液在5%CO2培养箱37℃贴壁培养HUVECs，待细胞平铺至培养瓶底部80%左右时，采用内源性过氧化氢酶抑制物（endogenous peroxidase blocking solution；EPBS）诱导HUVECs凋亡，观察Ex-4拮抗HUVECs凋亡的作用。实验分成4组，每组8瓶，包括①正常对照组(n=8)：不做任何处理；②Ex-4处理组(n=8)：(Ex-4，8μg/ml，45min)；③E PBS处理组(n=8)：(EPBS，，100μL/mL，30min)；④Ex-4预处理+EPBS处理组(n=8)：Ex-4预处理(8μg/mL，45min)后，加EPBS(100μL/mL，30min)。激光共聚焦确认HUVECs上存在胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1receptor，GLP-1R)；流式细胞仪检测细胞凋亡率，评价EPBS诱导HUVECs凋亡情况，以及Ex-4预处理对EPBS诱导HUVECs凋亡的影响。Westernblot检测CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白表达情况，探讨Ex-4拮抗HUVECs凋亡与内质网应激相关凋亡蛋白的关系。 结果：HUVECs上有GLP-1受体表达。EPBS处理组和正常对照组比较，EPBS能显著增加HUVECs的凋亡率[(52.27±3.66)%vs (7.25±0.62)%, P0.01]；Ex-4预处理+EPBS处理组与EPBS处理组比较，Ex-4可使EPBS诱导的HUVECs凋亡率明显降低[(37.77±2.86)%vs(52.27±3.66)%, P0.01]。Ex-4处理组和正常对照组比较，Ex-4明显抑制CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白的表达（0.68±0.06vs1.00±0.05,P0.01；0.52±0.10vs1.00±0.06, P0.01；0.64±0.10vs1.00±0.12,P0.01；0.68±0.05vs1.00±0.06, P0.01）；EPBS处理组和正常对照组比较，EPBS能增加CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白的表达(1.76±0.16vs1.00±0.05, P0.01；2.48±0.28vs1.00±0.06, P0.01；4.58±0.32vs1.00±0.12, P0.01；2.25±0.10vs1.00±0.06, P0.01)。Ex-4预处理+EPBS处理组和EPBS处理组比较，Ex-4预处理可使EPBS诱导的CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白的表达显著降低(0.42±0.05vs1.76±0.16,P0.01；0.66±0.08vs2.48±0.28, P0.01；1.65±0.12vs4.58±0.32,P0.01；1.48±0.08vs2.25±0.10, P0.01)。 结论：Ex-4预处理对EPBS诱导的HUVEC凋亡有明显抑制作用，其抑制作用与降低CLNX、IRE1a、CHOP和Bax蛋白的表达相关。
【关键词】：人脐静脉内皮细胞 内质网应激 细胞凋亡 内源性过氧化氢酶抑制物 艾塞那肽
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 1. 材料和方法15-19
• 1.1 材料15
• 1.2 方法15-18
• 1.3 统计学处理18-19
• 2. 结果19-27
• 2.1 GLP-1 受体在 HUVECs 的表达19-20
• 2.2 HUVECs 凋亡的检测20-22
• 2.3 Western blot 检测各组蛋白变化表达22-27
• 3. 讨论27-29
• 4. 结论29-30
• 参考文献30-35
• 文献综述35-44
• 参考文献38-44
• 致谢44-45
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文45-46

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 吴杰萍;郭志新;齐伟;俞媛贤;杜时晶;刘晋津;;艾塞那肽通过下调p22phox、NOX4和TGF-β1减轻1型糖尿病大鼠主动脉的氧化应激损伤[J];中国动脉硬化杂志;2013年08期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 王喜梅;Sitagliptin对缺氧环境下骨髓间充质干细胞的保护作用及相关机制研究[D];北京协和医学院;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 郑洲;代谢手术改善肥胖合并2型糖尿病患者血管舒张功能及相关机制[D];第三军医大学;2013年

2 叶菲;艾塞那肽与沙格列汀联合二甲双胍治疗2型糖尿病患者的疗效与安全性比较[D];重庆医科大学;2013年

本文编号：678427