慢病毒介导猪HOXB4基因在骨髓间充质干细胞中表达的研究

发布时间：2017-08-15 14:40

  本文关键词：慢病毒介导猪HOXB4基因在骨髓间充质干细胞中表达的研究

  更多相关文章： HOXB4 骨髓间充质干细胞 慢病毒

【摘要】：目的制备猪HOXB4基因重组慢病毒并感染骨髓间充质干细胞，，旨在初步探讨间充质干细胞转化为造血干细胞的关键技术。方法利用4质粒共转染293T细胞的方法制备猪HOXB4基因重组慢病毒，并感染骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）。⑴猪HOXB4基因表达质粒转染293T细胞，采用实时定量PCR及western blot方法检测质粒转染48h后HOXB4基因的表达情况。⑵采用4质粒共转染293T细胞的方法制备猪HOXB4基因重组慢病毒并进行病毒滴度的测定。⑶摸索猪HOXB4基因重组慢病毒感染BM-MSCs的最适MOI值，并进行猪HOXB4基因重组慢病毒感染BM-MSCs。病毒感染72h后，实时定量PCR及western blot方法检测HOXB4基因的表达，实时定量PCR法检测细胞中造血相关因子RUNX1、GATA2、SCL/TAL1的表达，流式细胞术检测病毒感染后细胞周期时相的变化，倒置显微镜下观察病毒感染后细胞形态的变化。结果⑴猪HOXB4基因表达质粒DNA转染293T细胞48h后，实时定量PCR及western blot方法均检测到HOXB4基因的高表达；质粒构建成功。⑵成功制备猪HOXB4基因重组慢病毒，病毒滴度为2×10~9TU/ml。⑶猪HOXB4基因重组慢病毒感染BM-MSCs，最适MOI值为30；病毒感染72h后，BM-MSCs中可见HOXB4基因和蛋白的高表达；倒置显微镜下观察发现BM-MSCs细胞形态出现了明显的变化，细胞伪足收缩向细胞靠拢，由长梭形逐渐变成椭圆形或半椭圆形；病毒感染BM-MSCs72h后，G0/G1期细胞明显增加，S期细胞明显下降，细胞处于静止期，细胞中造血相关因子RUNX1、GATA2明显升高、SCL/TAL1未见明显变化。结论本实验成功制备了高滴度的猪HOXB4基因重组慢病毒，感染BM-MSCs后发现HOXB4基因能够诱导BM-MSCs发生形态学变化并使细胞处于静止期和上调造血相关因子GATA2、RUNX1的表达，初步探讨了HOXB4基因在骨髓间充质干细胞中的作用，为后续骨髓间充质干细胞向造血干细胞转化、HOXB4基因转入间充质干细胞对免疫相关性疾病干细胞分化的影响及造血干细胞移植治疗肿瘤和免疫相关性疾病的实验研究奠定了基础。
【关键词】：HOXB4 骨髓间充质干细胞 慢病毒
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 英文缩写注解9-11
• 第1章 绪论11-13
• 第2章 综述13-20
• 2.1 HOXB4 基因及其与造血的关系13-16
• 2.2 间充质干细胞的研究进展16-20
• 第3章 猪 HOXB4 基因表达质粒的检测20-31
• 3.1 目的20
• 3.2 材料20-22
• 3.3 方法及步骤22-28
• 3.4 结果28-30
• 3.5 结论30-31
• 第4章 猪 HOXB4 基因重组慢病毒的制备31-35
• 4.1 目的31
• 4.2 材料31
• 4.3 方法及步骤31-33
• 4.4 结果33-34
• 4.5 结论34-35
• 第5章 猪HOXB4基因重组慢病毒感染骨髓间充质干细胞及其功能的检测35-42
• 5.1 目的35
• 5.2 材料35
• 5.3 方法及步骤35-37
• 5.4 结果37-41
• 5.5 结论41-42
• 第6章 讨论42-45
• 第7章 结论45-46
• 第8章 展望46-47
• 参考文献47-55
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果55-56
• 致谢56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 唐宇宏,费小明,沈文怡,缪扣荣,崔毓桂,陆化,汪承亚;定量PCR检测体外扩增脐带血造血干细胞HOXB4基因的表达[J];南京医科大学学报(自然科学版);2005年07期

2 杨立业,刘相名,惠国桢,费俭,郭礼和;皮肤间充质干细胞的体外培养和分化[J];生物医学工程学杂志;2005年03期

3 林晓波;何红燕;罗敏洁;崔冰琳;冯学永;蒋学武;谢庆东;黄天华;应文娟;马廉;;人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究[J];实用儿科临床杂志;2007年13期

本文编号：678742