锦灯笼茎水溶性多糖及电穿孔在核酸疫苗中免疫增强作用研究

发布时间：2017-08-17 11:13

  本文关键词：锦灯笼茎水溶性多糖及电穿孔在核酸疫苗中免疫增强作用研究

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【摘要】：锦灯笼又名酸浆、红姑娘、灯笼草等，为茄科酸浆属、多年生宿根草本植物，其宿存的花萼、全草及根均可入药。锦灯笼植株含酸浆醇A、B；苗、叶、茎含酸浆苦味素A、B、C、酸浆果红素、生物碱、构椽酸等人类生长不可多得的微量物质。近几年，随着对植物多糖研究的逐步深入，人们发现很多植物多糖都具有良好的免疫调节功能。多糖不仅能有效激活免疫细胞、提高机体免疫能力，而且对宿主正常细胞没有直接的毒副作用，因此被认为是一种重要的生物效应调节剂。本论文以锦灯笼茎水溶性多糖为研究对象研究其在核酸疫苗中免疫增强的效果。研究表明，锦灯笼茎水溶性多糖具有显著的免疫增强作用。 以锦灯笼茎水溶性多糖（WSP）作为疫苗佐剂与核酸疫苗共同免疫ICR雄性小鼠。免疫方式为胫前肌肌肉注射及胫前肌肌肉注射后进行电穿孔刺激，共免疫两次，免疫间隔时间为14天，第二次免疫14天后对免疫小鼠进行眼球取血，分离抗血清。通过下列实验来研究WSP及电穿孔的免疫增强作用：Western Blot检测免疫小鼠抗血清中抗体的特异性；ELISA检测抗血清中特异性抗体滴度；ELISA试剂盒检测抗血清中IL-2、IL-4、IL-10以及IL-12的含量；免疫保护实验研究WSP及电穿孔对pD-HSP90C免疫小鼠抗系统性白色念珠菌感染的影响。 实验结果表明，pD-HSP90C作为核酸疫苗，能够诱发免疫小鼠血清中产生特异性抗体。WSP作为疫苗佐剂与核酸疫苗共同免疫小鼠后，，与单独注射核酸疫苗组相比，其血清中特异性抗体IgG、IgG1和IgG2b滴度及IL-2、IL-4、IL-10和IL-12含量显著增高；通过胫前肌肌肉注射后进行电穿孔刺激的小鼠组分与直接胫前肌肌肉注射小鼠组分相比，这些特异性抗体及细胞因子含量同样显著提高。免疫保护实验结果显示，WSP与核酸疫苗共同免疫组小鼠，其肾组织匀浆培养得到的白色念珠菌菌落数显著少于核酸疫苗单独注射组；通过胫前肌肌肉注射后进行电穿孔刺激的小鼠与直接胫前肌肌肉注射小鼠组分相比，菌落数同样显著减少。肾脏组织切片的分析结果表明，WSP与核酸疫苗共同免疫组小鼠肾小球、肾小管受损程度明显弱于核酸疫苗单独处理组；通过胫前肌肌肉注射后进行电穿孔刺激的小鼠与直接胫前肌肌肉注射小鼠组分相比，肾小球、肾小管受损程度明显减弱。 本实验结果证明WSP作为核酸疫苗佐剂以及电穿能够显著增强小鼠体内Th1和Th2免疫应答，显著提高核酸疫苗免疫小鼠抵抗系统性白色念珠菌的感染能力，为WSP在疫苗佐剂领域中的应用以及电穿孔的应用奠定了坚实基础。
【关键词】：锦灯笼茎水溶性多糖 核酸疫苗 电穿孔 免疫保护 佐剂 白色念珠
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 中英文缩写9-10
• 第一章 引言10-20
• 1 核酸疫苗简介10-13
• 1.1 核酸疫苗的免疫机制10
• 1.2 核酸疫苗的优点及不足10-11
• 1.3 免疫途径、方法和剂量等11-12
• 1.4 电穿孔（electroporation）概述12-13
• 2 佐剂概述13-14
• 2.1 佐剂的概念13
• 2.2 佐剂的作用方式13-14
• 2.3 佐剂的分类14
• 3 植物多糖概述14-16
• 3.1 植物多糖的组成14-15
• 3.2 植物多糖的免疫调节作用15
• 3.3 植物多糖的其他作用15-16
• 4 锦灯笼多糖概述16-17
• 4.1 锦灯笼简介16
• 4.2 锦灯笼药理作用16-17
• 4.3 锦灯笼茎水溶性多糖简介17
• 5 白色念珠菌概述17-19
• 5.1 白色念珠菌简介17-18
• 5.2 白色念珠菌感染致病机理18
• 5.3 白色念珠菌热休克蛋白 9018-19
• 6 本研究目的及意义19-20
• 第二章 实验材料与方法20-35
• 1 实验材料及仪器20-22
• 1.1 实验材料20
• 1.2 实验试剂20-21
• 1.3 实验仪器21-22
• 2 实验方法22-35
• 2.1 核酸疫苗 pD-HSP90C 的制备及酶切验证22-25
• 2.2 重组蛋白 rP-HSP90C 的诱导表达、纯化25-26
• 2.3 WSP 及电穿孔在核酸疫苗 pD-HSP90C 中免疫增强作用研究26-27
• 2.4 Western blot 检测免疫小鼠抗血清中抗体特异性27-29
• 2.5 ELISA 检测免疫小鼠抗血清中抗 rP-HSP90C 特异性抗体滴度29-30
• 2.6 ELISA 试剂盒检测免疫小鼠抗血清中细胞因子的含量30-31
• 2.7 免疫后小鼠抗系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用研究31-34
• 2.8 数据分析34-35
• 第三章 实验结果与分析35-52
• 1 核酸疫苗 pD-HSP90C 的酶切鉴定35-36
• 2 重组蛋白 rP-HSP90C SDS-PAGE 分析36
• 3 WSP 及电穿孔免疫增强作用分析36-52
• 3.1 Western blot 检测免疫小鼠抗血清中抗体的特异性36-38
• 3.2 WSP 及电穿孔对免疫小鼠抗血清中抗 rP-Hsp90C 特异性抗体滴度的影响38-42
• 3.3 WSP 及电穿孔对 pD-HSP90C 免疫小鼠抗血清中细胞因子的影响42-46
• 3.4 WSP 及电穿孔对免疫小鼠抗系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用46-52
• 第四章 讨论52-56
• 1 WSP 增强了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠的 Th1 型和 Th2 型免疫应答及抗系统性白色念珠菌感染的能力52-54
• 1.1 WSP 增强了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠的 Th1 型和 Th2 型免疫应答52-53
• 1.2 WSP 增强了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠抗系统性白色念珠菌感染的能力53-54
• 2 电穿孔增强了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠的 Th1 型和 Th2 型免疫应答和抗系统性白色念珠菌感染的能力54-56
• 2.1 电穿孔增强了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠的 Th1 和 Th2 型免疫应答54
• 2.2 电穿孔增强了核酸疫苗 pD-HSP90C 免疫小鼠抗系统性白色念珠菌感染的能力54-56
• 结论56-57
• 1 WSP 增强了核酸疫苗 pD-HSP90C Th1 和 Th2 免疫应答和抗系统性白色念珠菌感染的能力56
• 2 电穿孔增强了核酸疫苗 pD-HSP90C Th1 和 Th2 免疫应答和抗系统性白色念珠菌感染的能力56-57
• 参考文献57-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 白日霞;多糖免疫药物研究进展[J];大连民族学院学报;2003年01期

2 和晶亮;;DNA疫苗的相关研究进展[J];动物医学进展;2007年S1期

3 王凯;;动物核酸疫苗的研究现状及发展前景[J];中国畜牧兽医;2010年08期

4 黄孝天;刘晶星;;新型佐剂的研制方向[J];国际生物制品学杂志;2006年03期

5 靳远祥,陈玉银;热休克蛋白的研究进展及其应用[J];科技通报;2002年02期

6 王丽,朱筱娟;白色念珠菌热休克蛋白90[J];科学通报;1999年23期

7 张宪党,马驰,张群,宁尚义;植物多糖抗辐射损伤作用研究进展[J];中国辐射卫生;2003年02期

8 杨琼;苏全平;温得中;王丽;;系统性白色念珠菌感染的免疫应答反应及疫苗研究进展[J];生理科学进展;2006年03期

9 张拥军,姚惠源,龚院生,谈新刚;南瓜多糖的分离提取及其降血糖作用的研究[J];食品科技;2001年05期

10 王晓娟;廖雪雁;;疫苗佐剂的研究进展[J];微生物学免疫学进展;2008年03期

本文编号：688692