未成熟睾丸组织体外生殖细胞发育的实验研究

发布时间：2017-08-17 11:21

  本文关键词：未成熟睾丸组织体外生殖细胞发育的实验研究

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【摘要】：目的建立睾丸组织体外培养模型，比较胎牛血清（FBS）和血清替代物-KnockoutTMSR(KSR)对睾丸组织生长发育的影响，观察SD大鼠和人未成熟睾丸组织在体外培养条件下生殖细胞发育情况。 方法 ①SD大鼠未成熟睾丸组织分别采用FBS和KSR连续培养5周,观测培养睾丸组织大体面积,苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织学形态及生殖细胞发育,并测量曲细精管直径。TUNEL凋亡实验观察培养5周睾丸组织中的凋亡细胞, RT-PCR检测精子发生不同阶段的标记基因Kit、Sycp3、Crisp1。 ②取睾丸肿瘤术中的瘤旁睾丸组织进行体外培养，，分别培养4w-17w，苏木素-伊红（HE）染色观察培养睾丸组织的组织学结构，测量曲细精管横截面积和直径，RT-PCR检测Piwil2基因在培养组织中的表达，免疫组化检测Piwil2蛋白在生殖细胞中的表达。 结果 ①KSR组睾丸组织体外持续生长,曲细精管逐渐增大,培养5周观察到精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、圆形精子细胞,RT-PCR检测到Kit、Sycp3、Crisp1的表达。FBS组睾丸组织随着培养时间延长逐渐萎缩,培养5周曲细精管中出现明显坏死,培养睾丸组织中Sycp3、Crisp1表达不稳定。 ②人睾丸组织培养初期（4w）曲细精管横截面积和直径逐渐增大，培养后期有减小趋势。培养8w后曲细精管中观察到类初级精母细胞，Piwil2免疫组化染色提示生殖细胞具有自我更新分化能力。 结论 ①KSR更利于未成熟睾丸组织培养中生殖细胞从精原细胞发育成精子细胞,并能长期维持生殖细胞发育、睾丸组织生长。 ②在体外培养条件下人未成熟睾丸组织中精原细胞可发育成精母细胞。培养8w生殖细胞仍然具有自我更新和分化能力，之后生殖细胞发育逐渐衰退。
【关键词】：睾丸 组织培养 精子发育
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R321.1
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-15
• 参考文献13-15
• 第一部分 胎牛血清和血清替代物-Knockout~TMSR 对未成熟睾丸体外生殖细胞发育的影响15-30
• 1. 材料和方法15-21
• 2. 结果21-26
• 3. 讨论26-28
• 4. 小结28-29
• 参考文献29-30
• 第二部分 人未成熟睾丸组织体外生殖细胞发育的实验研究30-39
• 1 材料和方法30-32
• 2 结果32-36
• 3 讨论36-37
• 4 小结37-38
• 参考文献38-39
• 全文总结39-40
• 文献综述40-49
• 参考文献44-49
• 致谢49-50
• 攻读学位期间发表的学术论文目录50-51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：688735