羊布鲁杆菌脂蛋白OMP19单克隆抗体制备与鉴定

发布时间：2017-08-18 10:24

  本文关键词：羊布鲁杆菌脂蛋白OMP19单克隆抗体制备与鉴定

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【摘要】：目的制备与鉴定羊布鲁杆菌脂蛋白OMP19单克隆抗体,用于布菌感染免疫机制研究。方法将OMP19基因连接入pET-30a(+)表达载体中,构建pET-30a(+)/OMP19质粒,转化入大肠埃希氏菌BL21(E3),以不同浓度异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,采用镍金属螯合亲和层析(NI-NTA)纯化;以布菌阳性血清检测重组蛋白免疫反应性,并利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,以天然OMP19蛋白及布菌外膜蛋白提取物(NMP)对制备的单克隆抗体进行Western Blot及酶免疫染色试验(IEST)鉴定。结果表达了OMP19蛋白,分子量约19kDa,通过纯化纯度可达95%,Western Blot分析显示蛋白具有良好的抗原性,并制备了OMP19抗原23株鼠源性单克隆抗体,鉴定结果显示22(95.65%)株能与天然OMP19蛋白反应,18(78.26%)株能与NMP反应,其中IgG1(k)亚型占91.30%;4株能与羊种布鲁氏菌菌涂片反应。结论成功制备具有良好抗原性的重组OMP19蛋白,筛选出识别天然蛋白的单克隆抗体,已初步应用于布菌的检测,为OMP19抗原B细胞表位的筛选奠定基础。
【作者单位】： 南方医科大学生物技术学院输血医学系;韶关学院英东生命科学学院;
【关键词】： 布鲁杆菌 OMP 蛋白表达 单克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金项目(31372443;31100657) 广东省自然基金项目(2011B090400407)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 布鲁氏菌病(Brucellosis,布病),是布鲁杆菌(简称布菌)引起的急性或慢性传染病,属严重人兽共患传染病。近年来,通过接触带菌动物造成羊、牛布鲁杆菌病感染的病例大量增加,根据中国疾病预防控制中心公布数据,2013年布病发病人数比2008年增加57%,达43 486例,以每年10%新增速度成

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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【相似文献】

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本文编号：694068