成都地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制和同源性分析

发布时间：2017-08-19 03:14

  本文关键词：成都地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制和同源性分析

  更多相关文章： 鲍曼不动杆菌 碳青霉烯酶 外排泵 DiversiLab系统 同源性

【摘要】：目的：筛选耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的菌株，从基因水平研究碳青霉烯酶和外排泵基因在耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中的作用，分析成都地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的同源性，为本地区医院感染控制提供重要依据。 方法：1.收集成都地区临床和医院环境中分离的鲍曼不动杆菌复合群160株，通过多重PCR对其中的鲍曼不动杆菌进行快速鉴定。2.采用琼脂稀释法检测鲍曼不动杆菌对14种抗生素的耐药性，筛选耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌。3.通过多重PCR检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的苯唑西林类酶（OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58和OXA-143）和PCR法检测金属酶（NDM-1、IMP、VIM和SIM），同时通过PCR检测插入序列ISAba1及其与OXA酶的关系。4.采用PCR检测外排泵基因AdeABC、AdeIJK和AbeM，荧光定量PCR分别检测对碳青霉烯类敏感和耐药菌株外排泵基因AdeABC、AdeIJK和AbeM的表达情况。5.应用DiversiLab系统分析整个地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的同源性。 结果：1.多重PCR结果显示，在160株鲍曼不动杆菌复合群中有132株（132/160,82.5%）为鲍曼不动杆菌。2.132株鲍曼不动杆菌中筛选到79株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌，耐药率为59.84%（79/132）；药敏结果显示，，79株CRAB对常用抗生素有较高耐药率，其中对头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟，耐药率分别为79.9%、84.8%，而其余抗生素耐药率均大于90%。3.多重PCR结果显示，在79株CRAB菌株中均检测到OXA-51和OXA-23，在20株碳青霉烯类敏感鲍曼不动杆菌中只检测OXA-51，未检测到OXA-23；仅有一株检出IMP基因，其余碳青霉烯酶基因均未检测到，提示产OXA-23基因可能是CRAB的主要耐药机制之一；PCR结果显示，在79株CRAB菌株中均检测到ISAba1序列，同时在77株CRAB菌株中检测到ISAba1-OXA-23结构，且通过测序比对发现ISAba1存在于OXA-23基因上游；同时发现含有ISAba1-OXA-23结构的77株CRAB菌株对碳青霉烯类抗生素完全耐药，而不含ISAba1-OXA-23结构的2株CRAB菌株对其中一种碳青霉烯类抗生素敏感，提示ISAba1-OXA-23结构可能与CRAB耐药相关。4. PCR结果显示,79株CRAB菌株扩增外排泵基因AdeB、AdeJ和AbeM的阳性率分别为58.2%、96.2%和97.5%，20株敏感鲍曼不动杆菌扩增外排泵AdeB、AdeJ和AbeM的阳性率分别为25%、85%和95%，说明对碳青霉烯类敏感和耐药鲍曼不动杆菌均可检测到外排泵基因，提示外排泵基因表达及其表达调控可能与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药有关。5.荧光定量PCR结果显示，CRAB菌株的外排泵AdeJ基因表达量比CSAB菌株增加了5.59倍，而外排泵AdeB和AbeM表达量无明显变化，提示AdeJ基因表达量的改变与CRAB的耐药有关。6.DiversiLab系统将40株代表性CRAB菌株分为4个不同亲缘关系的克隆组及9个亚克隆组，其中克隆组1为最流行的克隆，且在5家医院都有分布，提示CRAB克隆组1在整个地区存在播散的可能。 结论：1.通过分子生物学方法和琼脂稀释法药敏试验准确筛选出CRAB菌株。2.整个成都地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素和其他常用抗生素耐药广泛，并存在多重耐药的现象。3.鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的一个主要机制是产生OXA-23酶，ISAba1存在于OXA-23基因上游，且ISAba1-OXA-23结构可能与CRAB耐药相关。4.对碳青霉烯类敏感或耐药的鲍曼不动杆菌均可存在外排泵基因，外排泵AdeIJK基因表达增高可能是CRAB耐药的原因之一。5.CRAB在成都地区部分医院内和医院间存在相同的流行克隆组，应加强整个地区的鲍曼不动杆菌感染的防控措施。
【关键词】：鲍曼不动杆菌 碳青霉烯酶 外排泵 DiversiLab系统 同源性
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-15
• 第一部分 鲍曼不动杆菌的分子鉴定和抗菌药物敏感性试验15-25
• 1 材料与方法15-21
• 2 结果21-23
• 3 讨论23-25
• 第二部分 耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶基因和外排泵基因分析25-39
• 1 材料与方法26-32
• 2 结果32-37
• 3 讨论37-39
• 第三部分 利用 DiversiLab 系统分析鲍曼不动杆菌的同源性39-46
• 1 材料与方法39-41
• 2 结果41-44
• 3 讨论44-46
• 全文总结46-47
• 参考文献47-53
• 文献综述53-66
• 参考文献61-66
• 致谢66-67
• 攻读硕士期间发表的学术论文67-68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 赵旺胜;江淑芳;顾兵;吴姗姗;刘根焰;张巧娣;吴海玮;;南京地区鲍曼不动杆菌喹诺酮类药物耐药基因突变的研究[J];临床检验杂志;2007年02期

2 王政;刘丁;陈萍;程晓斌;王豪;成瑶;;重症监护室产OXA-23碳青霉烯类酶的鲍曼不动杆菌的分子流行病学研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2011年09期

本文编号：698331