靶向ezrin、radixin、moesin的siRNA慢病毒感染原代肺微血管内皮细胞促进流感病毒的复制

发布时间：2017-08-19 10:23

  本文关键词：靶向ezrin、radixin、moesin的siRNA慢病毒感染原代肺微血管内皮细胞促进流感病毒的复制

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【摘要】：目的构建分别靶向ezrin(E)、radixin(R)、moesin(M)的siRNA慢病毒表达载体,转染原代大鼠肺微血管内皮细胞,观察其对E、R、M基因表达及流感病毒复制的影响。方法根据siRNA设计原理,化学合成靶向大鼠E、R、M基因的siRNA序列,克隆入慢病毒表达质粒GV248,构建分别靶向E、R、M基因的慢病毒siRNA载体Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA,同时构建靶向无关序列的Lenti-control-siRNA;组织块法分离培养大鼠原代肺微血管内皮细胞(PMVEC);Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA转染原代大鼠PMVEC后,荧光定量PCR检测E、R、M的mRNA的表达,Western blot法检测ERM蛋白的表达,激光共聚焦显微镜技术检测ERM蛋白的分布;FM1流感病毒鼠肺适应株感染慢病毒转染的PMVEC后,荧光定量PCR检测慢病毒载体对流感病毒复制的影响。结果重组质粒经测序鉴定,Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-MsiRNA、Lenti-control-siRNA构建成功。慢病毒载体转染大鼠PMVEC,感染复数(MOI)为10时感染率达80%以上。Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA明显抑制PMVEC中E、R、M的转录及表达。流感病毒感染PMVEC中,慢病毒空载体及Lenti-control-siRNA抑制流感病毒的复制,而Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA增加PMVEC中流感病毒的mRNA水平。结论成功构建靶向ERM基因的慢病毒载体,证实其可稳定转染PMVEC特异高效地抑制E、R、M基因表达;慢病毒载体本身能抑制PMVEC中流感病毒复制,而靶向E、R、M的慢病毒siRNA却促进流感病毒的复制。
【作者单位】： 北京中医药大学基础医学院医学病原系;上海市复旦大学附属肿瘤医院中西医结合科;
【关键词】： 小干扰RNA ezrin radixin moesin 肺微血管内皮细胞 流感病毒 复制
【基金】：国家自然科学基金(81102697) 北京中医药大学创新团队“经方现代应用关键科学问题的基础研究”(2011-CXD-04)
【分类号】：R373
【正文快照】： 埃兹蛋白(ezrin,E)、根蛋白(radixin,R)和膜突蛋白(moesin,M),是细胞骨架-细胞膜连接蛋白,在不同种属间具有高度的同源性,属于血红蛋白4.1超家族[1]。ERM蛋白的结构和功能具有高度同源性,在氨基末端有1个高度保守的FERM(four-point-one-protein,ezrin,radixin,moesin)功能域,

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：700179