脐血来源的间充质干细胞的分化潜能研究

发布时间：2017-08-19 11:24

  本文关键词：脐血来源的间充质干细胞的分化潜能研究

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【摘要】：目的：间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是具有多向分化潜能的成体干细胞,能朝着间充质组织（mesenchymal tissues）分化，如骨组织、软骨组织、脂肪组织等。近年来研究显示脐血中存在间充质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)，能朝着骨、脂肪、软骨、心肌、神经组织分化。由于其易获取、具有多系分化潜能可以用来修复组织缺损，此外免疫原性低可以用来预防移植抗宿主病的发生。然而它们在脐血中的数量非常少，分离的成功率较低。在诱导分化方面，与骨髓间充质干细胞相比脐血间充质干细胞表现出来的分化结果在很多研究中不一致，需进一步进行研究证实。本课题旨在通过优化培养条件，提高脐血间充质干细胞培养的成功率，对UCB-MSCs的脂肪分化潜能做进一步的研究。 方法：1.提高脐血的总量，大于80ml，，密度梯度离心获取单个核细胞，选择最适培养基进行培养，根据胎牛血清的浓度，进行优化培养，提高成功率。 2.对贴壁细胞进行表面抗原的鉴定，对其表达的粘附分子进行RT-PCR检测。 3.加入脂肪细胞分化诱导培养基，进行脂肪方向分化。结果：脐血间充质干细胞在DMEM低糖培养基加上15%胎牛血清的培养基成原代培养成功率高，细胞表达CD29、CD44、CD59、CD90、CD73、CD105、CD166不表达或弱表达HLA-ABC、HLA-DR、CD13、CD14、CD31、CD106。CXCR4、SDF-1、CD54、CD49d的基因可见阳性表达。UCB-MSCs在脂肪分化培养基的诱导下形成空泡状油红O染色为红色的脂肪细胞。 结论：通过Ficoll密度离心方法我们成功分离出单个核细胞，通过形态学观察、免疫分型检测、粘附分子基因表达等鉴定可以证实我们所培养的细胞是脐血间充质干细胞，通过脂肪诱导分化结果证实了脐血间充质干细胞可以朝着脂肪方向分化。
【关键词】：脐带血 间充质干细胞 分化 组织工程 缺损修复 优化培养
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-10
• 1. 研究方案10
• 2.材料与方法10-17
• 2.1 材料10-11
• 2.1.1 主要仪器10-11
• 2.1.2 主要试剂11
• 2.2 方法11-16
• 2.2.1 脐血的收集及脐血间充质干细胞的提取11
• 2.2.2 脐血间充质干细胞的培养11-12
• 2.2.3 脐血间充质干细胞的表面抗原检测12
• 2.2.4 粘附分子基因检测12-13
• 2.2.5 总的 RNA 的抽取和处理13-16
• 2,2.5.1 总的 RNA 的抽取13-14
• 2.2.5.2 总的 RNA 的测定14
• 2.2.5.3. 总的 RNA 的处理14-15
• 2.2.5.4 RT-PCR15-16
• 2.2.5.5. PCR 扩增产物检测16
• 2.3 脂肪分化16-17
• 2.3.1 诱导条件和方法步骤16-17
• 2.3.2 脂肪诱导分化后油红 O 染色17
• 3. 统计方法17
• 4. 实验结果17-25
• 4.1 脐血间充质干细胞原代培养结果17-19
• 4.2 脐血间充质干细胞细胞表面抗原流式细胞检测结果19-24
• 4.2.1 脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞免疫分型的比较结果23-24
• 4.3 脐血间充质干细胞的诱导分化结果24-25
• 5. 讨论25-28
• 参考文献28-32
• 附录A32-33
• 附录 B33-47
• 参考文献40-47
• 致谢47

【共引文献】

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1 林放;王甜甜;王世春;孟强;尹智平;陆华;蒋天伦;赵树铭;;3种血小板生成的关键因子共转染人骨髓基质细胞的研究[J];中国输血杂志;2012年03期

2 王琪;苟三怀;汤亭亭;刘岩;欧阳跃平;席焱海;韩庆林;;脐血间充质干细胞体外培养方法的改良及其生物学特性研究[J];第二军医大学学报;2007年01期

3 马云胜;秦书俭;穆长征;;人脐血CD44~+细胞的分离培养及其分化潜能的初步鉴定[J];第三军医大学学报;2010年18期

4 朱亦X;乔振华;赵嘉慧;朱镭;孙彦;李兴;赵宝珍;;不同培养方法骨髓破骨细胞样细胞分化及活性的实验观察[J];中华风湿病学杂志;2006年05期

5 吴玉卓;陈红;;脐血间充质干细胞体外诱导成肝细胞的研究进展[J];中国肝脏病杂志(电子版);2008年02期

6 李陈;肖玉周;;不同来源的间充质干细胞生物学特性差异研究进展[J];创伤外科杂志;2014年01期

7 田新;符仁义;陈艳;袁粒星;;脐带组织间充质干细胞分离及向成骨与脂肪细胞的分化[J];四川大学学报(医学版);2008年01期

8 张云海;邓廉夫;杨庆铭;;骨髓单核细胞和骨髓基质干细胞联合诱导破骨细胞样细胞[J];老年医学与保健;2006年03期

9 王元元;杨洋;高扬;杨亚东;李国灵;鲁元刚;;如何在临床学习中培养医学生的美学修养[J];中国美容医学;2012年09期

10 CHEN YiHuan;TENG XiaoMei;CHEN WeiQian;YANG JunJie;YANG ZiYing;YU YunSheng;SHEN ZhenYa;;Timing of transplantation of autologous bone marrow derived mesenchymal stem cells for treating myocardial infarction[J];Science China(Life Sciences);2014年02期

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1 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

2 程颖;葛根素促进小鼠胚胎干细胞源工作心肌细胞的分化及其调控机制[D];华中科技大学;2011年

3 杨大志;BMP-2/胶原/掺锶羟基磷灰石成骨活性材料的研究[D];华中科技大学;2011年

4 朱亦X;PPARγ2转录因子与Ⅱ型原发性骨质疏松关系的实验研究[D];山西医科大学;2006年

5 孙爱红;脐血源贴壁细胞生物学特性和单个核细胞骨髓腔内移植NOD/SCID小鼠实验研究[D];中国协和医科大学;2004年

6 陆德云;1.阿德福韦酯治疗拉米夫定耐药HBeAg（+）慢性乙肝的临床研究 2.重型肝炎患者血浆对体外培养脐血间充质干细胞影响的初步研究[D];四川大学;2006年

7 王琪;人脐带血间充质干细胞复合β-磷酸三钙的骨组织工程学实验研究[D];第二军医大学;2007年

8 田新;脐血及脐带静脉内皮下间充质干细胞的分离扩增与分化[D];四川大学;2007年

9 索利敏;脐血间充质干细胞体外分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞的研究[D];山西医科大学;2009年

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2 荣靖;KGF-2和穿膜型KGF-2的构建、纯化及其对人脐带间充质干细胞增殖、分化的影响[D];暨南大学;2011年

3 苏晓华;牛胎肝间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究[D];东北林业大学;2011年

4 张丽;脐血浆活性成分分析及其对脐血CD34~+细胞增殖的影响[D];郑州大学;2011年

5 张帆;淫羊藿苷诱导人脐带间充质干细胞分化为成骨细胞的实验研究[D];郑州大学;2011年

6 李保环;脐血干细胞移植术在溃疡性结肠炎治疗中的临床应用[D];山东大学;2011年

7 周小波;人脐血间充质干细胞体外分离培养与扩增的实验研究[D];广州医学院;2010年

8 王金良;清脑灵含药血清诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成神经元样细胞[D];华中科技大学;2010年

9 王柱;早产儿与足月儿脐血间充质干细胞体外分离、培养及鉴定[D];广州医学院;2011年

10 王兴凯;VEGF诱导成神经分化的间充质干细胞定向迁移研究[D];苏州大学;2011年

本文编号：700444