人关节液对骨髓间充质干细胞定向分化影响的实验研究

发布时间：2017-08-19 23:14

  本文关键词：人关节液对骨髓间充质干细胞定向分化影响的实验研究

  更多相关文章： 关节液 骨髓间充质干细胞 软骨细胞 软骨组织工程共培养

【摘要】：目的体外获得人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs),并对获取的hBMSCs进行纯化、扩增及鉴定。通过人关节液与hBMSCs混合培养,研究共培养系统导致hBMSCs定向诱导分化的影响,探讨关节液对hBMSCs的作用,为以关节液和BMSCs作为软骨组织工程基质的使用奠定一定的基础。方法从因创伤导致不同部位的骨折需行骨折复位及髂骨植骨术的志愿者中,获取骨髓,采用全骨髓、贴壁培养法培养和分离hBMSCs。在实验过程中,我们还对培养的hBMSCs进行了冻存和复苏。实验在倒置相差显微镜下观察细胞生长形态；取生长状态良好的P3代细胞进行表面标志物的表达和细胞表型的鉴定；取生长状态良好的P1、P2、P3代细胞,分别用胰蛋白酶消化、培养,以培养时间为横轴,细胞数为纵轴,绘制hBMSCs生长曲线图。在无菌操作下,患者取坐位,双膝下垂,穿刺部位按常规进行皮肤消毒,用2%利多卡因作局部麻醉,于健康志愿者的膝关节的髌骨下缘、髌韧带外侧1cm处,定位后用一次性10号注射针头与胫骨平台平行,向内呈45度角,穿刺进入,针头完全刺入即可,抽取膝关节内的关节液,将其与生长良好的P3细胞混合用于实验,将24孔板盲法随机分为3组(A组、B组及C组),每组8孔,每个孔板内放置无菌并用多聚赖氨酸预处理过的爬片,其中：A组：单纯关节液组(关节液+含体积分数10%FBS+1%双抗的HG-DMEM);B组：关节液+hBMSCs组(关节液+hBMSCs+含体积分数10%FBS+1%双抗的HG-DMEM);C组：单纯hBMSCs组(hBMSCs+含体积分数10%FBS+1%双抗的HG-DMEM)。每’天在倒置显微镜下观察细胞形态变化和生长情况,分别于诱导后第7,14,21天行甲苯胺蓝染色检测酸性糖胺多糖表达,免疫组化染色检测细胞Ⅱ型胶原表达。结果经全骨髓、贴壁培养法培养分离获得了纯度较高hBMSCs,细胞呈均一的长梭形、短梭形及多角形,漩涡状或辐射状结构,绘制的生长曲线呈S形。所分离培养的细胞表达CD29、CD44、CD90、CD105分别为：99.6%、100%、99.4%、92.5%,呈均一、高表达性；而表达CD34、 CD45分别为：0.5%、0.6%,呈低表达性。hBMSCs与关节液混合培养后,细胞增殖速度减慢,由长梭形变为多角形、椭圆形,细胞外基质呈甲苯胺蓝异染性阳性,Ⅱ型胶原免疫组化阳性,表现出向关节软骨细胞分化的特点。结论全骨髓、贴壁培养法可成功分离hBMSCs,该方法具有操作简便、经济及污染少等优点。该实验结果提示,关节液对hBMSCs向软骨细胞分化有正性促进作用,关节液中可能含有促hBMSCs向软骨细胞方向分化的物质,支持关节液作为软骨组织工程基质使用。
【关键词】：关节液 骨髓间充质干细胞 软骨细胞 软骨组织工程共培养
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 前言8-10
• 材料与方法10-19
• 结果19-21
• 讨论21-28
• 结论28-29
• 参考文献29-32
• 英汉缩略词对照表32-33
• 附图33-38
• 致谢38-39
• 骨髓间充质干细胞修复关节软骨损伤的研究进展(综述)39-51
• 参考文献46-51
• 攻读学位期问发表的论文51-53
• 附件53-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 付小兵;;组织再生:梦想、希望和挑战[J];中国工程科学;2009年10期

2 华强;柴天朋;吴佳奇;;骨髓间充质干细胞修复关节软骨损伤的研究进展[J];骨科;2011年03期

3 王常勇,郭希民,方泽强,段翠密,赵强,王永红,陈惠华,薄斌,范明,卢建熙;应用组织工程化人工软骨修复羊关节软骨缺损的实验研究[J];军事医学科学院院刊;2002年02期

4 张利铭;陈智超;邹萍;李秋柏;;全骨髓贴壁法分离培养人骨髓间充质干细胞及成骨诱导分化[J];临床血液学杂志;2012年03期

5 张怡,赵连三,唐红;小鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养[J];生物医学工程学杂志;2004年05期

6 李丽艳;黄金中;杜江;;转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年01期

7 刘显文;祝颂松;胡静;;Notch信号通路与关节软骨发育及骨关节炎[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年11期

8 陈宗雄;刘晓强;王万宗;;骨髓间充质干细胞和关节软骨细胞共培养与转化生长因子β1诱导的比较[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年27期

9 王万宗;陈宗雄;刘晓强;;骨髓间充质干细胞与关节软骨细胞Transwell共培养诱导形成软骨[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年38期

10 宋芹;颜军;郭晓强;姚倩;郁小兵;;羟基磷灰石/胶原蛋白复合支架上骨髓间充质干细胞的增殖与分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年47期

，

本文编号：703452