疟原虫高通量分子检测法的建立及其在疟疾根除行动中的应用

发布时间：2017-08-20 05:20

  本文关键词：疟原虫高通量分子检测法的建立及其在疟疾根除行动中的应用

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【摘要】：[研究目的] 虽然疟疾仍然是世界上最主要的传染性疾病之一,但是近年来包括中国在内的许多国家都已成功的控制了疟疾在当地的传播。这就使得疟疾的根除在这些地区成为可能。当一个国家或地区开展疟疾根治运动时,该疾病的诊断策略就要从被动的诊断单个患者转为主动的筛查所有的潜在感染者,所谓的潜在感染者包括无症状表现的患者以及低虫血率的患者。然而现存的疟疾诊断方法都无法满足主动筛查疾病时所需要的高通量以及高灵敏度。在本课题中,我们致力于建立一个简便、灵敏、可靠的高通量疟原虫检测方法,并将该方法应用于疟疾的大规模主动筛查中。 [方法] 我们采用了一个三明治式的RNA杂交系统直接检测恶性疟和间日疟病人外周血中存在的疟原虫18s rRNA(下称疟原虫18S rRNA杂交检测法)。该方法不需要提取或纯化RNA,也不需要对RNA进行逆转录,检测过程通过一系列探针杂交完成。这些探针含有两部分杂交位点：一部分可以跟靶标分子特异性结合；另一部分可以跟固定于固相表面的核酸序列或者信号检测系统中的核酸序列相结合。疟原虫18S rRNA杂交检测法采用类似于酶联免疫反应的检测流程在96孔板上进行,每例样品仅需20微升。经过实验室验证之后,我们使用该方法对202名疟疾疫区不明发热病人的临床血样进行了检测,并将检测结果与显微镜镜检、快速诊断试纸条以及荧光定量PCR的检测结果进行了平行对比。 [结果] 疟原虫18S rRNA杂交检测法检出了所有66例显微镜镜检确诊的疟疾病例,这其中包括59份经过反复冻融过的血样；该方法还分别在3例显微镜镜检阴性和4例快速诊断试纸条阴性的样品中检测到了疟原虫,这个结果与荧光定量PCR的结果一致。所有疟原虫18S rRNA杂交检测法判定为阴性的样品,在另外三种方法中也被判定为阴性。本方法对于恶性疟原虫的检测下限为0.04个每微升。 [结论] 本课题所设计的高通量疟原虫检测方法流程简单、灵敏度高,适用于大规模的疟疾主动筛查。该方法对于疟疾传播率较低的地区、计划或正在开展疟疾根除运动的地区以及面临输入型疟疾威胁的地区都具有重要意义。
【关键词】：疟原虫 RNA 高通量 筛查
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R382.31
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-6
• 前言6-13
• 实验材料13-15
• 实验试剂及耗材13
• 探针和引物13
• 疟原虫虫株13
• 健康人血样品13
• 临床病人血样的采集13-14
• 主要的仪器设备14-15
• 实验方法15-20
• 临床样品的显微镜检查15
• 恶性疟原虫的体外培养15-16
• 实验室疟原虫采集与计数16
• 实验室干血片的制作16
• 疟原虫的18S rRNA杂交检测法16-17
• 1. 分子靶标的确定16-17
• 2. 样品裂解暨18S rRNA的释放及保护17
• 3. 18S rRNA的检测17
• RDT诊断17-18
• DNA的提取及荧光定量PCR18-20
• 结果20-31
• 疟原虫 18S rRNA杂交检测法的方法学验证20-28
• 临床样品的检测28-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 附录36-52
• 参考文献52-56
• 致谢56-57
• 简历57-58

【共引文献】

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10 张为朵;伤寒病人的中医辨证施护[J];辽宁中医学院学报;2005年05期

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1 龙世平;过表达ads和hdr基因对青蒿素生物合成的影响[D];西南大学;2013年

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