粉尘螨第24组过敏原cDNA克隆表达及其免疫学特性的研究

发布时间：2017-08-21 07:30

  本文关键词：粉尘螨第24组过敏原cDNA克隆表达及其免疫学特性的研究

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【摘要】：目的克隆表达粉尘螨第24组过敏原cDNA,研究其免疫学特性,为深入研究尘螨致敏机制提供基础。方法以粉尘螨cDNA文库为模板,根据Der f24基因序列(GenBank Accession No.KC669700)设计引物,PCR扩增Der f24cDNA,构建原核表达载体pET-His-Derf24,并经酶切鉴定和DNA测序,转化至E.coli BL21(DE3)plysS,用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达;重组产物经Ni 2+螯合层析纯化,获得重组的Der f24(14kDa);对重组蛋白进行IgE-Western blotting(WB)实验和IgE-ELISA实验;通过Swiss-model软件模拟Der f24的3D结构并通过DNAStar软件分析其潜在的B细胞表位,合成三个肽(位置分别为75-88aa、44-57aa和104-117aa)进行IgE-ELISA实验。结果克隆的Der f24基因cDNA序列全长为357bp,编码118个氨基酸(GenBank Accession No.KP064571);Der f24原核表达主要形式为不可溶的包涵体,纯化后的重组Der f24蛋白分子量约为14kDa。IgE-WB结果显示,重组Der f24与10例粉尘螨过敏患者血清呈强阳性反应,而与10例健康对照组均为阴性。IgE-ELISA结果显示,合成表位肽(No.1 75-88aa:Z=5.6734、No.2 44-57aa:Z=5.6720和No.3 104-117aa:Z=5.6791;P0.0001)均与22例粉尘螨过敏患者血清呈阳性反应,而与22例健康对照组血清呈阴性反应。结论本研究成功克隆表达了Der f24cDNA,重组Der f24可结合粉尘螨过敏血清IgE,鉴定了3个潜在的IgE B细胞表位。本研究为进一步防治螨性过敏性疾病奠定了技术基础。
【作者单位】： 深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所;深圳市过敏反应与免疫学重点实验室;深圳大学第一附属医院;
【关键词】： 粉尘螨 Der f cDNA克隆 过敏原性 B细胞表位
【基金】：国家自然科学基金(No.31328014,No.31400786) 广东省科技计划(No.2013B03180002) 深圳市科技计划(No.JCYJ20130326112225593)联合资助~~
【分类号】：R392
【正文快照】： Fund:Supported by the National Natural Science Foundation of China((No.31328014and No.31400786),the Science andTechnology Foundation of Guangdong Province(No.2013B03180002)and the Science and Technology Foundation of ShenzhenCity(No.JCYJ20130326112225593

【共引文献】

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1 滕飞翔;俞黎黎;卞勇华;孙金霞;张承伯;王楠;杨李;崔玉宝;;尘螨变应原Der f 6、Der p 6和Blo t 6结构的比较研究[J];基因组学与应用生物学;2014年04期

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中国硕士学位论文全文数据库 前2条

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【相似文献】

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3 蔡黎,项t，

本文编号：711613