双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用

发布时间：2017-08-21 16:28

  本文关键词：双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用

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【摘要】：目的:探讨双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)体系在细胞自噬中的作用。方法:采用不同浓度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-II/LC3-I比值;单荧光GFP-LC3质粒和双荧光mRFP-e GFP-LC3质粒转染HEK293细胞,雷帕霉素(200 nmol/L)处理3 h,采用荧光显微镜统计,并比较两种方法转染后HEK293细胞内LC3亮点的变化。结果:不同浓度雷帕霉素处理HEK293细胞,LC3-II蛋白和LC3-II/LC3-I比值均增加;转染GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色亮点的数量增加;转染mRFP-e GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色和红色亮点数量均增加。结论:双荧光mRFP-e GFP-LC3体系优于单荧光GFP-LC3体系,更能全面完整地反映细胞自噬水平,能够反映细胞内自噬流的变化,是自噬定量分析的可靠方法。
【作者单位】： 广州心血管疾病研究所广州医科大学附属第二医院心内科;
【关键词】： 雷帕霉素 自噬 人胚肾细胞 LC 单荧光GFP-LC质粒 双荧光mRFP-e GFP-LC
【基金】：国家自然科学基金青年项目(81300151)
【分类号】：R363
【正文快照】： 自噬(autophagy)即自体吞噬,与异体吞噬相对,是细胞内形成的双层膜结构包绕自己内部受损伤的蛋白质或细胞器,比如线粒体、内质网或高尔基体碎片等,进而与溶酶体融合将其内容物降解的过程。越来越多的研究发现,自噬与恶性肿瘤、心脏疾病、神经退行性疾病等密切相关[1-2],这使得

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本文编号：713953