旋毛虫膜蛋白新基因Tmp10的免疫筛选及鉴定

发布时间：2017-08-21 16:26

  本文关键词：旋毛虫膜蛋白新基因Tmp10的免疫筛选及鉴定

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【摘要】：目的免疫筛选旋毛虫成虫c DNA文库,寻找抗旋毛虫病的疫苗候选抗原或诊断抗原。方法应用旋毛虫感染的猪血清免疫筛选旋毛虫成虫c DNA文库,获得阳性克隆。将一阳性克隆与原核表达载体p ET-28a(+)构建重组质粒,异丙醇硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导后,利用亲和层析柱纯化目的蛋白,并通过酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和Western blotting鉴定其抗原特异性和免疫原性。结果免疫筛选旋毛虫成虫c DNA文库获得42个阳性克隆,选取一个新基因Tmp10,成功构建了重组质粒p ET-28a(+)/Tmp10,诱导表达后获得的重组蛋白(r Tmp10)的相对分子质量约为40 000。Western blotting检测结果显示,该重组蛋白可被旋毛虫感染小鼠和猪血清所识别,具有抗原特异性。r Tmp10免疫小鼠可诱导产生高滴度的抗体,显示其具有较好的免疫原性。结论免疫筛选旋毛虫成虫c DNA文库获得一个新基因Tmp10,生物信息学分析预测其为膜蛋白,其重组蛋白(r Tmp10)具有较好的抗原特异性和免疫原性。
【作者单位】： 首都医科大学基础医学院病原生物学系;
【关键词】： 旋毛虫 cDNA文库 膜蛋白 表达
【基金】：国家自然科学基金(81371837) 国家传染病科技重大专项(2012ZX10004220-012) 北京市自然科学基金(5122007)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病,其临床表现较为复杂,目前理想的无创性的检验及诊断方法仍未找到[1-2],且尚无有效抗病疫苗问世。因此,寻找特异有效的旋毛虫抗原一直是研究的热点。通过构建c DNA文库,通过适宜的方法从文库中钓取c D-NA,是寻找新的特异性抗原基因的较好

【参考文献】

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中国重要会议论文全文数据库 前2条

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本文编号：713942