缺氧诱导因子-1α介导的热休克蛋白70在热耐受对抗高温诱导的心肌细胞凋亡中的作用

发布时间：2017-08-22 17:14

  本文关键词：缺氧诱导因子-1α介导的热休克蛋白70在热耐受对抗高温诱导的心肌细胞凋亡中的作用

  更多相关文章： 缺氧诱导因子-1ɑ 热休克蛋白70 热耐受 热应激 细胞凋亡

【摘要】：目的： 观察在非致死性高温诱导的热耐受过程中HIF-1α对HSP70的表达的影响及其在热耐受保护中的作用。阐明热耐受过程中HSP70的表达是否具有HIF-1ɑ依赖性，HIF-1ɑ介导的HSP70是否通过其抗细胞凋亡作用参与心肌细胞热耐受保护。 方法： （1）将H9c2心肌细胞随机分为12组，每组实验重复3次：常温对照组（Control组）、热耐受组（T组）、热耐受/高温组（T/H组）、高温组（H组）、DMSO+常温对照组（DMSO组）、YC-1干预+热耐受组（YC-1+T组）、YC-1干预+热耐受/高温（YC-1+T/H组）、YC-1干预+高温组（YC-1+H组）、Lipo+常温对照组（Lipo组）、RNAi干扰+热耐受组（RNAi+T组）、RNAi干扰+热耐受/高温（RNAi+T/H组）、RNAi干扰+高温组（RNAi+H组）。（2）培养H9c2心肌细胞，建立热耐受(40℃，3h）及热应激（43℃，2h）模型。（3）使用HIF-1α的特异性抑制剂YC-1（终浓度100μM/L），在转录后水平抑制HIF-1α的表达后进行热耐受或高温处理。（4）使用Lipofectamine2000转染HSP70-siRNA于H9c2心肌细胞后进行热耐受或高温处理。（5）采用AnnexinV-FITC双染流式细胞法检测各组细胞的凋亡率；Western blot检测细胞HIF-1ɑ、HSP70及caspase-3蛋白表达情况。 结果： （1）热耐受/高温组的细胞凋亡率显著低于高温组（p0.01）。抑制HIF-1ɑ表达后的热耐受/高温组和高温组的凋亡率均显著高于未经YC-1处理的相应组（p0.01），并且抑制HIF-1ɑ表达后，，热耐受/高温组与高温组的凋亡率没有显著差别。（2）与常温对照组相比，热耐受能显著提高HIF-1ɑ和HSP70的表达水平（p0.05）；热耐受/高温组的HIF-1ɑ和HSP70表达水平均明显高于高温组（p0.01）。与对照组相比，YC-1能够明显抑制热耐受组、热耐受/高温组及高温组的HIF-1ɑ（p0.01）。抑制HIF-1ɑ表达后的热耐受组、热耐受/高温组及高温组，其HSP70的表达也显著低于对照组（p0.01）。使用HSP70-siRNA抑制HSP70的表达后，热耐受/高温组HIF-1ɑ的表达量仍显著高于高温组（p0.01）。（3）热耐受/高温组的caspase-3表达水平显著低于高温组（p0.01）。抑制HIF-1ɑ表达后，热耐受/高温组及高温组caspase-3的表达水平均明显增加（p0.01），并且抑制HIF-1ɑ表达后，热耐受/高温组与高温组caspase-3的表达水平没有显著差别。 结论： （1）HIF-1ɑ在热耐受对抗高温诱导的细胞凋亡过程中发挥保护作用；（2）热耐受及热应激时HSP70的表达具有HIF-1ɑ依赖性；（3）HIF-1ɑ介导的HSP70通过其抗细胞凋亡作用参与心肌细胞热耐受保护。
【关键词】：缺氧诱导因子-1ɑ 热休克蛋白70 热耐受 热应激 细胞凋亡
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料与方法13-25
• 2.1 实验材料13-16
• 2.1.1 细胞来源13
• 2.1.2 主要购置试剂13-14
• 2.1.3 主要自配试剂14-15
• 2.1.4 主要仪器设备15-16
• 2.2 方法16-25
• 2.2.1 细胞培养16-17
• 2.2.2 建立热耐受及热应激模型17-18
• 2.2.3 YC-1 干预18
• 2.2.4 HSP70-siRNA 干预18
• 2.2.5 实验分组18-20
• 2.2.6 AnnexinV-FITC 双染流式细胞法检测细胞凋亡率20-21
• 2.2.7 Western blot 检测 H9c2 心肌细胞中 HIF-1ɑ、HSP70 和 Caspase 3 蛋白的表达21-23
• 2.2.8 统计学分析23-25
• 第3章 结果25-31
• 3.1 HIF-1ɑ在热耐受对抗高温诱导的心肌细胞凋亡中的作用25-26
• 3.2 热耐受对抗高温诱导的心肌细胞凋亡时各组细胞 HIF-1ɑ和 HSP70 蛋白的表达26-27
• 3.3 YC-1 干预后各组细胞 HIF-1ɑ和 HSP70 蛋白的表达27-28
• 3.4 YC-1 干预前、后各组细胞 Caspase 3 蛋白的表达28-29
• 3.5 HSP70-siRNA 干扰后各组细胞 HIF-1ɑ和 HSP70 蛋白的表达29-31
• 第4章 讨论31-34
• 第5章 结论34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-38
• 攻读学位期间的研究成果38-39
• 综述39-43
• 参考文献42-43

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘波;石京山;龚其海;;缺氧诱导因子-1的稳定性调节[J];遵义医学院学报;2012年06期

2 朱巍,张海鹏;缺氧诱导因子1[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2001年02期

3 李华,王斌;缺氧诱导因子-1降解的调控[J];生命的化学;2004年02期

4 王鸿程 ,应敏刚;缺氧诱导因子-1与恶性肿瘤[J];福建医药杂志;2005年03期

5 沈括;冯建明;;缺氧诱导因子1α活性调节机制及其应用进展[J];高原医学杂志;2006年02期

6 杨盛力;张万广;陈孝平;梁慧芳;;缺氧诱导因子-3的研究进展[J];中国现代普通外科进展;2007年04期

7 马雅銮;宋剑南;;缺氧诱导因子在动脉粥样硬化中的调节作用[J];中国动脉硬化杂志;2008年09期

8 李丽华;张莉;屈艺;母得志;;诱导缺氧诱导因子1表达的相关因素[J];医学研究杂志;2009年02期

9 赵小祺;王春光;张静;;缺氧诱导因子-1研究进展[J];河北北方学院学报(医学版);2009年05期

10 黄生炫;刘窗溪;熊云彪;;缺氧诱导因子-1在缺血缺氧性脑损伤中的作用[J];中风与神经疾病杂志;2012年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 郎立伟;周晴;李燕;陈晓光;;缺氧诱导因子-1抑制剂的筛选与研究[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年

2 谭新杰;焦桂萍;胡长林;蔡文琴;刘健;杨华;刘窗溪;韩国强;熊云彪;;缺氧诱导因子-1α基因在成年大鼠局灶性脑缺血中的治疗作用研究[A];贵州省医学会神经外科学分会第七届学术交流会暨神经外科学新进展学习班论文集[C];2006年

3 徐桂萍;孔宏亮;;缺氧诱导因子1a过表达对骨髓间充质干细胞缺氧时生存能力的影响[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

4 潘坤;戴爱国;胡瑞成;;缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶与OS-9在大鼠缺氧性肺动脉高压中的作用[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年

5 张文亮;李荣亨;;缺氧诱导因子-1与RA及OA[A];全国中西医结合强直性脊柱炎专题研讨会论文汇编[C];2007年

6 冯涛;张春媛;戴艳萍;遇亚南;田春光;靳美;曹利;;缺氧诱导因子与脑卒中[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

7 范小斌;姚元庆;李东红;;缺氧对Bewo细胞系中缺氧诱导因子2及其靶基因VEGF表达的影响[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

8 张铭;;缺氧诱导因子-1的靶向治疗研究进展[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

9 李贺;崔苏萍;邓君;;肾缺血再灌注损伤后缺氧诱导因子(HIF-1α)的动态表达[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年

10 朱东明;李德春;;缺氧诱导因子2与缺氧诱导因子1对胰腺癌中血管内皮生长因子表达的作用[A];苏州市自然科学优秀学术论文汇编(2008-2009)[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 记者 常丽君;一种蛋白复合物可矫正大脑葡萄糖感知缺陷[N];科技日报;2011年

2 记者 衣晓峰 通讯员 董宇翔;缺氧诱导因子可调控心肌肥厚[N];健康报;2012年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 任sズ

本文编号：720363