温度对体外大鼠睾丸支持细胞增殖活力及occludin蛋白表达的影响

发布时间：2017-08-23 08:41

  本文关键词：温度对体外大鼠睾丸支持细胞增殖活力及occludin蛋白表达的影响

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【摘要】：目的观察不同温度对原代大鼠睾丸支持细胞增殖活力与紧密连接蛋白Occludin (OCLN)表达的影响。探讨不同温度在雄性生殖功能障碍中的作用机制。 方法体外分离青春期雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),用两步酶消化法获取后培养,进行油红O染色和免疫组化FasL鉴定。实验在(34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃)不同的温度条件下培养4d后,CCK-8法检测SC增殖活力,HE染色观察细胞形态变化,VWestern blot和免疫荧光法检测OCLN表达量,并进行统计学分析。 结果体外分离培养SC纯度90%,免疫组化显示FasL蛋白表达阳性,CCK-8和HE染色结果显示,细胞活力在36℃时增殖最强,36℃后随温度增高活力逐渐减弱,细胞边界不清、间隙变大,39℃时核裂解明显；免疫荧光及Western Blot结果显示：36℃时荧光呈亮绿色,高于筇℃培养时,伴随着温度的增高OCLN蛋白表达量逐渐降低,差异有显著性(P0.01)。 结论本研究结果显示：高温抑制SC的生长并使OCLN的表达明显减少,推测高温破坏了支持细胞间紧密连接的完整性,影响正常的生精过程的局部环境。
【关键词】：温度 支持细胞 Occludin 血睾屏障 精子发生
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R321.1
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-7
• 第1章 材料和试剂7-10
• 1.1 实验动物7
• 1.2 主要实验试剂7-8
• 1.3 主要仪器设备与工具8-10
• 第2章 实验方法10-15
• 2.1 原代SC细胞培养10-11
• 2.2 SC细胞鉴定11
• 2.2.1 油红O染色操作步骤11
• 2.2.2 免疫组化操作步骤11
• 2.3 实验分组及培养11-12
• 2.4 CCK-8测细胞增值活性12
• 2.5 SC细胞HE染色12
• 2.6 检测OCLN表达水平12-14
• 2.6.1 免疫荧光法操作步骤12-13
• 2.6.2 蛋白提取的操作步骤13
• 2.6.3 Western blotting测定13-14
• 2.7 统计方法14-15
• 第3章 实验结果15-19
• 3.1 SC细胞体外培养生长特点15
• 3.2 SC细胞鉴定15
• 3.3 温度对Sertoli细胞增殖活性的影响15-17
• 3.4 温度对Sertoli细胞OCLN的表达的影响17-19
• 第4章 讨论19-21
• 结论21-22
• 参考文献22-24
• 文献综述24-34
• 参考文献29-34
• 攻读学位期间的研究成果34-35
• 致谢35-36

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：724085