2008-2012年我国B型流感病毒耐药毒株的流行状况及生物学特性研究

发布时间：2017-08-23 12:09

  本文关键词：2008-2012年我国B型流感病毒耐药毒株的流行状况及生物学特性研究

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【摘要】：研究背景： 2007年,季节性流感耐药毒株的出现和广泛传播引起了全球的极大关注,开展流行株的耐药性监测显得尤为必要。从目前的监测情况看,A型流感病毒对烷胺类药物已存在普遍耐药,因此建议不再使用烷胺类抑制剂治疗和预防流感。而目前的流感毒株大多依然对NA抑制剂敏感,故目前NA抑制剂是治疗和预防A型、B型流感的有效药物。然而,对NA抑制剂耐药或敏感性降低的B型流感病毒,人们对其生物学特性的了解还很有限。 研究目的： 分析2008-2012年我国B型流感病毒对NA抑制剂的耐药情况,探究我国B型流感病毒耐药相关突变株的体内外生长特性,以期揭示其感染性和传播性等特点,并为B型流感病毒耐药突变位点补偿位点的筛选提供线索。 研究方法： 对我国2008-2012年分离自ILI (Influenza like illness)病例的682株B型流感病毒通过基因型分析法和表型分析法,挑选出耐药相关突变株(MUT)及其野生型敏感对照株(WT),并对其进行3次噬斑纯化,进一步在细胞(MDCK)水平和动物(雪貂)水平上对其进行复制力、感染性和传播性等生物学适应性研究。 主要结果： 我国2008-2012年共发现6株B型流感耐药相关突变株。与WT株(B/SichuanYucheng/1238/2010)相比,携带NA I221T耐药突变和HA S208P伴随突变的MUT株(B/Shanghai-Pudongxi/1125/2011)对oseltamivir的敏感性降低(ICs0值升高9倍)；在体外水平上,MUT株对底物的亲和力和在MDCK细胞中的复制能力均略高于WT株,但二者无明显差异；在体内水平上,MUT株和WT株均可通过密切接触而在雪貂间有效传播,MUT株的传播效率略低于WT株但二者无明显差异。 结论： 2008-2012年我国B型流感病毒耐药相关突变株出现的比例很低,MUT株和WT株在体内外的生物学特性相似,这提示NA I221T突变可能并不影响毒株在体内外的生物学特性,HA S208P伴随突变或许起到一定的补偿作用,但需进一步通过反向遗传的实验方法验证。同时,B型耐药相关突变株的出现及其生物学适应性与野生株的相似也提示在我国乃至全球加强B型流感病毒耐药性持续监测的重要性。
【关键词】：B型流感病毒 耐药 生物适应性 雪貂
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.13
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-16
• 第一部分 2008-2012年我国B型流感病毒耐药相关突变株的筛选及其序列特征分析16-29
• 1 材料与方法16-20
• 1.1 序列来源16
• 1.2 耐药相关突变株筛选16
• 1.3 CL法测IC_(50)16-19
• 1.4 序列分析和进化树分析19
• 1.5 突变位点在蛋白质分子模型中的标记19-20
• 2 结果20-27
• 2.1 我国2008-2012年B型流感耐药相关突变株筛选20-21
• 2.2 NA耐药相关突变位点与伴随突变位点特征分析21-23
• 2.3 NA和HA基因序列进化分析23-24
• 2.4 耐药相关突变株的NA和HA蛋白晶体结构特点24-27
• 3 讨论27-28
• 4 小结28-29
• 第二部分 B型耐药相关突变株的噬斑纯化29-40
• 1 材料与方法29-36
• 1.1 病毒29
• 1.2 细胞29
• 1.3 试剂和耗材29-30
• 1.4 方法30-36
• 2 结果36-38
• 2.1 噬斑纯化MUT病毒37
• 2.2 纯化后MUT病毒和WT病毒的序列分析37-38
• 2.3 扩大培养38
• 3 讨论38-40
• 第三部分 B型耐药相关突变株及其野生株体外生物学特性研究(细胞水平)40-47
• 1 方法40-43
• 2 结果43-45
• 2.1 生长曲线测定43-44
• 2.2 NA酶活测定44-45
• 3 讨论45-47
• 第四部分 B型耐药相关突变株体内生物学特性研究(动物水平)47-61
• 1 材料与方法47-53
• 2 结果53-59
• 2.1 雪貂抗体水平53-56
• 2.2 雪貂体温变化56-57
• 2.3 雪貂洗鼻液病毒载量57-59
• 3 小结59-60
• 4 讨论60-61
• 第五部分 讨论61-63
• 结论63-64
• 参考文献64-66
• 综述66-81
• 流行性感冒病毒耐药性监测研究进展66-73
• 参考文献70-73
• 流行性感冒病毒耐药性检测方法研究进展73-81
• 参考文献78-81
• 致谢81-85
• 论文发表和会议报告情况85

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 杨子峰;秦笙;陈晓红;莫自耀;王丹芬;关文达;钟南山;;甲型流感病毒空斑形成技术的改进和应用[J];第三军医大学学报;2009年17期

2 贾双荣;张可s，

本文编号：724951