Tet-on慢病毒系统表达弓形虫ROP18的研究

发布时间：2017-08-24 05:43

本文关键词：Tet-on慢病毒系统表达弓形虫ROP18的研究

【摘要】：目的用Tet-on慢病毒载体系统构建稳定表达弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)的293T细胞株。方法PCR扩增ROP18基因序列插入慢病毒载体p LVCT-t TR-KRAB中,构建带有ROP18活性片段的慢病毒载体p LVCT-t TRKRAB-ROP18。经鉴定后将该重组载体(6μg)与辅助质粒ps PAX2(4μg)和p MD2.G(2μg)共同转染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞荧光。于转染后48和72 h收集含有慢病毒颗粒上清液,感染293T细胞。以1μg/ml强力霉素(DOX)诱导293T细胞表达ROP18,荧光显微镜下观察细胞荧光,RT-PCR法检测293T细胞中的ROP18表达情况。结果 PCR扩增rop18片段为960 bp,与预期大小一致。经PCR和酶切鉴定重组慢病素载体构建成功。转染48 h后,293T细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光。经DOX诱导24 h即可观察到293T细胞中明亮绿色荧光。RT-PCR检测结果显示,293T细胞ROP18可产生960 bp特异条带,与预期结果一致。结论采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定表达弓形虫ROP18的293T细胞株。
【作者单位】：江苏大学医学院;中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心;
【关键词】： 刚地弓形虫 棒状体蛋白 慢病毒 四环素诱导调控表达系统
【基金】：国家自然科学青年基金(No.81301453) 卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题(No.WSBKTKT201302) 中国博士后科学基金(No.2014M561598) 江苏省博士后科研资助计划(No.1402171C) 江苏大学高级人才启动基金(No.13JDG023,13JDG127)~~
【分类号】：R382.5
【正文快照】： (1 School of Medicine,Jiangsu University,Zhenjiang 212013,China;2 National Institute of ParasiticDiseases,Chinese Center for Disease Control and Prevention;Key Laboratory of Parasite and Vector Biology,MOH;WHO Collaborating Centre for Malaria,Schistosomi

【参考文献】

中国期刊全文数据库前4条

1 王淑艳;张愚;;慢病毒载体的设计及应用进展[J];中国生物工程杂志;2006年11期

2 吴亮;章秋霞;李婷婷;陈盛霞;曹建平;;人包皮成纤维细胞和人子宫颈癌细胞体外培养弓形虫速殖子[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2009年03期

3 吴亮;薛兰兰;王晓;吴腊梅;姜旭淦;陈盛霞;;用四环素诱导调控表达系统构建弓形虫脂肪酸合成酶FABZ缺陷株[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2014年04期

4 都建;安然;程里;陈滢;沈继龙;;酵母双杂交筛选与弓形虫毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2013年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库前10条

1 耿海涛;肖乾;徐邓勇;胡立锋;丁克峰;;HNF6重组慢病毒载体的构建及对大肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响[J];南方医科大学学报;2012年01期

2 李伟;高玲;;慢病毒载体在眼科基因治疗的应用[J];国际眼科杂志;2008年09期

3 刘洋博;何刚;章波;庞学利;;慢病毒介导shRNA沉默HDAC1表达对EC109细胞生长特性的影响[J];第三军医大学学报;2013年10期

4 潘志敏;马勇;程细高;;常用病毒载体的基础研究及临床应用[J];中国生化药物杂志;2011年05期