基于报告基因的抗CD20单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立

发布时间：2017-08-24 07:32

  本文关键词：基于报告基因的抗CD20单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立

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【摘要】：利用Jurkat/NFAT-luc+FcγRIIIa转基因细胞系作为效应细胞,WIL2-S细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(Bio GloTM Luciferase Assay System)进行抗CD20单抗的ADCC生物学活性检测,并对实验条件进行优化及方法学验证。结果显示抗CD20单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D。方法经优化确定靶细胞为WIL2-S细胞,抗体稀释浓度为18 000 ng·m L-1,1∶5倍的稀释倍数,效靶比为6∶1,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性,8次独立实验的回归分析、线性及平行性均通过统计学检验;4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(44.39±3.93)%、(72.74±2.78)%、(128.28±7.01)%和(168.19±2.70)%,变异系数均小于10%,对应回收率分别为(88.78±7.85)%、(96.99±3.70)%、(102.63±5.61)%和(112.12±1.80)%。本研究利用转基因细胞法成功建立抗CD20单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗CD20单抗ADCC生物学活性的常规检测方法。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院;
【关键词】： 抗CD单克隆抗体 ADCC 生物学活性
【基金】：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2014ZX09304311-001,2012ZX09304010) 中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金资助项目(2012B6)
【分类号】：R392
【正文快照】： (National Institutes for Food and Drug Control,Beijing 100050,China)1为本文的共同第一作者.CD20抗原是分子量为35 k D的非糖基化跨膜蛋白,CD20作为B细胞表面特有的分化抗原,在95%以上的B细胞淋巴瘤细胞膜上高密度表达,而在造血干细胞、血浆细胞和其他正常组织中不表达,

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本文编号：730002