骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝脏纤维化的实验研究

发布时间：2017-08-26 12:44

  本文关键词：骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝脏纤维化的实验研究

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【摘要】：目的：⑴探讨大鼠骨髓间充质干细胞（ratbonemarrowmesenchymalstemcells,rBMSCS)体外分离纯化扩增培养的方法以及慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein,eGFP)对其进行标记的理想条件；⑵观察移植的骨髓间充质干细胞在肝脏纤维化模型鼠肝内的分布,迁移和分化状况，并从病理以及血清学水平评价移植细胞对肝脏纤维化模型大鼠的治疗效果，为临床自体骨髓间充质干细胞移植治疗肝脏疾病提供实验基础和理论依据。 方法：⑴利用密度梯度离心结合贴壁生长的方法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞，流式细胞术对其表面抗原进行鉴定，，并用eGFP对其进行标记；⑵四氯化碳腹腔注射构建SD大鼠肝脏纤维化模型；以eGFP标记的正常SD大鼠骨髓间充质干细胞为细胞来源，通过尾静脉注射将标记的细胞移植入肝脏纤维化模型大鼠体内，对照组注射生理盐水。⑶细胞移植后取大鼠肝脏做组织病理学检查：冰冻切片在荧光显微镜下观察eGFP阳性细胞在肝内的分布状况；石蜡切片行GFP/ALB免疫荧光双染检测归巢细胞在肝内的分化；免疫组化检测α-SMA在肝内的表达状况；⑷同时采集大鼠血液，以全自动生化分析仪和化学发光法检测肝功能指标和血清纤维化指标。 结果：⑴体外分离获得了高纯度贴壁生长的大鼠BMSCs，流式细胞仪鉴定结果显示细胞高表达CD44、CD90，而CD34、CD45表达阴性；并用携带eGFP报告基因的慢病毒成功对其进行感染，感染率达80%以上。⑵腹腔注射CCL410周后成功构建SD大鼠肝脏纤维化模型。⑶BMSCs移植大鼠肝脏中可检测到eGFP阳性的细胞，主要沿着中央静脉及汇管区周围纤维间隔分布，并逐渐向肝组织内部迁移。免疫组化结果显示eGFP阳性细胞呈肝细胞样细胞形态，且与肝组织相容。免疫荧光双染法检测到部分eGFP阳性细胞同时表达白蛋白（ALB）。α-SMA在肝组织的表达明显减少。⑷BMSCs移植组与模型对照组和生理盐水组相比，肝功能和血清纤维化指标好转，差异具有统计学意义（P0.01）。 结论：⑴BMSCs经尾静脉移植具有向纤维化肝脏归巢的能力，定植于肝脏并且向肝细胞样细胞分化；⑵BMSCs移植能抑制大鼠肝脏纤维化发展，部分逆转肝脏纤维化进程，有效改善肝脏功能。
【关键词】：肝脏纤维化 骨髓细胞 间质干细胞 干细胞移植 增强型绿色荧光蛋白（eGFP） 治疗 归巢 分化 肝细胞样细胞
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.2;R-332
【目录】：

• 目录4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 第一部分 SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养、鉴定，以及慢病毒介导的GFP示踪标记12-29
• 材料与方法12-17
• 结果17-24
• 讨论24-29
• 第二部分 SD大鼠肝脏纤维化模型的构建以及干细胞在肝脏纤维化模型体内的归巢、分化以及疗效分析29-53
• 材料与方法29-35
• 结果35-47
• 讨论47-53
• 结论53-54
• 参考文献54-59
• 致谢59-60
• 附录A. 英中文术语和缩略语对照表60-61
• 附录B. 个人简历61-62
• 附录C. 综述62-68
• 参考文献67-68

【参考文献】

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1 向国安,张刚庆,方驰华,高鹏,陈开运;同种异体骨髓间质干细胞移植在大鼠肝内定居能力初步研究[J];第一军医大学学报;2005年08期

2 谢金敏;陈建锋;高毅;姚坤厚;;人骨髓间充质干细胞体外分化为肝样细胞的实验研究[J];南方医科大学学报;2006年10期

3 汪群力;裴国献;云雄;金丹;魏宽海;任高宏;;绿色荧光蛋白标记骨髓基质干细胞在恒河猴体内构建组织工程骨的示踪作用[J];南方医科大学学报;2007年02期

4 张本斯,王凡,邓力,顿爱社,董立华,李健,羊惠君;大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及表型和功能特点[J];四川大学学报(医学版);2003年04期

5 张明鸣;贾贵清;程惊秋;杨平;陆燕蓉;伍晓汀;;大鼠骨髓间质干细胞的BrdU体外标记和体内示踪研究[J];四川大学学报(医学版);2012年02期

6 贾海燕;田浩明;;大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离、培养及鉴定[J];医药论坛杂志;2011年12期

7 符岳;王彤;梁蔚文;方向韶;黄子通;;大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及向神经元样细胞分化的实验研究[J];岭南急诊医学杂志;2006年01期

8 罗衍波;陈斌;倪勇;陈剑雄;马经野;;慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞研究[J];中国热带医学;2009年02期

9 陈鹏飞;吴小翎;周伟;彭阳;芦曦;;大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞的定向诱导分化[J];中国生物制品学杂志;2011年01期

10 周伟;陈鹏飞;吴小翎;姜蓉;徐艳华;;骨髓间充质干细胞对实验性肝纤维化大鼠的作用及其机制[J];中国生物制品学杂志;2012年02期

本文编号：741578