大规模纯化脊髓灰质炎病毒的蔗糖垫层离心法的建立

发布时间：2017-08-26 12:22

  本文关键词：大规模纯化脊髓灰质炎病毒的蔗糖垫层离心法的建立

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【摘要】：目的建立可大规模纯化脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的蔗糖垫层离心法。方法病毒大量增殖后,收集病毒液,经PEG浓缩、三氟三氯乙烷抽提后,采用蔗糖垫层或Cs Cl密度梯度离心法纯化PV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),电镜下观察病毒形态,进行核酸及感染性滴度的检测。将纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV免疫豚鼠,心脏采血,分离血清,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度。结果蔗糖垫层离心法纯化的各型PV,病毒颗粒形态典型,背景清晰,除完整的光滑型病毒颗粒外,还可见大量空心病毒颗粒样品,纯化效果较好;Cs Cl密度梯度离心法纯化的PV样品,病毒形态也较典型,但完整的病毒颗粒较多。两种纯化方法获得的病毒基因组核酸特征显著,背景清晰,无明显差异。蔗糖垫层离心法纯化的各型PV的感染性滴度及免疫后豚鼠血清中和抗体滴度均高于Cs Cl密度梯度离心法。结论蔗糖垫层离心法纯化的PV纯度高,免疫原性好,可用于大规模纯化PV或其他病毒。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所;云南民族大学;
【关键词】： 脊髓灰质炎病毒 蔗糖垫层 纯化
【基金】：云南省自然科学基金项目(2013FZ130,2012FD039)
【分类号】：R392
【正文快照】： 大规模纯化病毒的方法除了经典的蔗糖密度梯度离心法和Cs Cl密度梯度离心法外,还有胶体硅密度梯度离心法(colloidal silica gradient)、简单的离子交换层析法、尺寸排阻层析法[1-2]以及Monoliths整体层析柱法[3-4]等。这些方法因费时、成本高、操作繁琐等,在实际运用中具有一

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本文编号：741476