结核分枝杆菌抗毒素higA的原核表达及多克隆抗体制备

发布时间：2017-08-28 11:40

  本文关键词：结核分枝杆菌抗毒素higA的原核表达及多克隆抗体制备

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【摘要】：目的克隆编码结核分枝杆菌抗毒素基因hig A并在大肠杆菌中表达,纯化hig A蛋白后,制备兔抗hig A的多克隆抗体。方法利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增hig A基因;构建重组表达质粒p ET-32a(+)-hig A;筛选出阳性重组质粒后,转化大肠杆菌BL21,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;利用SDS-PAGE与Western blot法鉴定目的蛋白的表达;以纯化的hig A蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗hig A的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定。结果成功扩增出了hig A基因,克隆于载体p ET-32a(+)质粒中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确;转化大肠杆菌BL21后能成功诱导hig A蛋白[相对分子质量(Mr)36 630]的表达;利用纯化的hig A蛋白免疫新西兰大白兔后,能有效地刺激特异性hig A抗体的产生,抗体的效价达到1∶3200以上。结论成功在大肠杆菌中表达出hig A蛋白,并制备出效价及特异性良好的兔抗hig A多克隆抗体。
【作者单位】： 潍坊医学院临床检验诊断学教研室;潍坊医学院附属医院检验科山东省临床检验诊断学高校重点实验室;潍坊医学院基础医学院病原生物学教研室;菏泽市第三人民医院检验科;中国人民解放军第401医院检验科;
【关键词】： 结核分枝杆菌 毒素抗毒素系统 higA 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(30972639,81170080)
【分类号】：R392
【正文快照】： 毒素抗毒素系统(toxin-antitoxin system,TAS)最早发现于大肠杆菌的质粒中,可通过分裂后致死效应来维持质粒在大肠杆菌中的稳定存在。有学者认为TAS可发挥诱导细菌程序性细胞死亡(bacterialprogrammed cell death,BPCD)、诱导细菌的可逆性休眠、应激条件下介导持留菌形成、调

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本文编号：747910