帕金森病模型大鼠黑质自噬的表达和药物干预研究

发布时间：2017-08-28 22:17

  本文关键词：帕金森病模型大鼠黑质自噬的表达和药物干预研究

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【摘要】：目的观察帕金森病（Parkinson's disease, PD）模型大鼠黑质自噬的表达和咪多吡药物干预对其表达的影响，探讨自噬在PD发病中的作用及咪多吡治疗帕金森病的作用机制。 方法1.健康雄性SD大鼠90只按随机数字法分为正常对照组（对照组）、帕金森病模型组（模型组）和咪多吡治疗组（咪多吡组），每组又分为模型制备后4d、8d两个亚组，每个亚组各15只大鼠，其中，6只用于免疫组化染色，6只用于Western blotting法检测，3只用于透射电镜观察。2.采用颈背部皮下注射鱼藤酮制作PD模型。3.模型制备成功后给予咪多吡（0.5mg/kg）灌胃，分别连续给药4d和8d。4.透射电镜观察黑质自噬体的形成；免疫组化和Western blotting法检测黑质Beclin1和LC3的表达水平。5.组织切片采用OLYMPUS显微镜（400×）摄像，应用Motic Med6.0数码医学图像分析系统进行分析，Western blotting结果用Image J分析。6.数据采用SPSS13.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差（x s）表示，组间比较采用单因素方差分析，以P0.05认为有统计学意义。 结果1.透射电镜下，对照组大鼠黑质中神经元细胞核型规则，核膜完整，染色质分布均匀，胞质内细胞器丰富，结构基本正常，，未见到自噬体。模型组4d时，神经元细胞中出现自噬体，呈圆形，多位于细胞核旁，溶酶体数量增多。8d时，自噬体、溶酶体数量显著增多。咪多吡组神经元细胞损伤较模型组减轻，可见到正常的细胞器，依然可见肿胀线粒体及粗面内质网，4d时，可见自噬小体，但较模型组明显减少。8d时，未见到自噬体。2.与对照组相比较，模型组大鼠黑质中Beclin1、LC3蛋白表达和LC3II/LC3I比值增多（P0.05），8d高于4d，有显著性差异（P0.05）。与模型组相比较，咪多吡组黑质中Beclin1、LC3蛋白表达和LC3II/LC3I比值降低（P0.05），8d低于4d，有显著性差异（P0.05）。 结论1. PD模型大鼠黑质中自噬被激活，自噬参与了PD的发生发展过程；2.咪多吡可能通过抑制PD模型大鼠黑质神经细胞自噬，发挥对帕金森病的治疗作用。
【关键词】：帕金森病 自噬 LC3 Beclin1 药物干预 咪多吡
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R742.5;R-332
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 第1章 实验研究11-35
• 1.1 材料与方法11-20
• 1.1.1 主要药物和试剂11
• 1.1.2 主要仪器和器材11
• 1.1.3 实验动物及分组11-12
• 1.1.4 动物模型制备及给药12-13
• 1.1.5 电镜观察13-14
• 1.1.6 免疫组化检测方法14-16
• 1.1.7 免疫印迹检测方法16-20
• 1.1.8 统计学分析20
• 1.2 结果20-27
• 1.2.1 各组大鼠黑质电镜观察结果20-22
• 1.2.2 各组大鼠黑质 Beclin1、LC3 免疫组化结果22-25
• 1.2.3 各组大鼠黑质 Beclin1、LC3 II /LC3I 免疫印迹检测结果25-27
• 1.3 讨论27-31
• 1.3.1 帕金森病动物模型的制备27-29
• 1.3.2 自噬及其观察结果29
• 1.3.3 各组大鼠黑质 Beclin1 和 LC3 的表达变化29-30
• 1.3.4 咪多吡对 PD 模型大鼠的作用30-31
• 1.4 结论31
• 参考文献31-35
• 第2章 综述 关于自噬与帕金森病的研究35-50
• 2.1 自噬概述36
• 2.2 自噬的发生过程36-37
• 2.3 自噬的分子机制37-39
• 2.3.1 自噬发生的分子机制37-38
• 2.3.2 自噬的调控机制38-39
• 2.4 自噬的双重功能39-40
• 2.4.1 自噬的保护作用39-40
• 2.4.2 自噬与细胞的死亡40
• 2.5 自噬的检测40-42
• 2.5.1 透射电子显微镜下超微结构的观察41
• 2.5.2 自噬相关蛋白的检测41-42
• 2.6 自噬与帕金森病42-44
• 2.6.1 α-突触核蛋白与自噬42-43
• 2.6.2 PINK1 与自噬43-44
• 2.6.3 DJ-1 与自噬44
• 参考文献44-50
• 致谢50-51
• 导师简介51-52
• 作者简介52-53
• 学位论文数据集53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：749769