代谢型谷氨酸受体2同源二聚体激活过程中单体选择机制的研究

发布时间：2017-08-30 18:35

  本文关键词：代谢型谷氨酸受体2同源二聚体激活过程中单体选择机制的研究

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【摘要】：代谢型谷氨酸受体（Metabotropic glutamate receptors, mGluRs）属于C族G蛋白偶联受体（G-protein coupled receptors, GPCRs），与G蛋白相偶联，经细胞内第二信使系统如磷脂酶C（PLC）和腺苷酸环化酶（AC）而发挥作用。同C族其他受体一样，是组成性的二聚体，但与γ-氨基丁酸受体（GABABR）和味觉受体第一家族（TIR）不同，，mGluRs为组成性同源二聚体，每个单体由捕蝇草模块（Venus FlytrapModual，VFT）、半胱氨酸富集区（Cystein rich Region，CRD）、七次跨膜螺旋结构域（Heptahelical Domain，HD）和胞内的C末端所组成。而同源二聚体中激活过程中的顺反效应和激活机制一直是研究的热点，mGluRs因其稳定二聚化和多功能域的特性而成为研究该问题的模式受体。 本文以mGluR2为研究对象，检测了其激活过程中的顺反效应和参与单体选择机制的结构域。首先我们利用分子生物学方法构建了mGluR2的人工异源二聚体以及VFT和i3loop上的功能缺失突变体，通过电穿孔转染的方法将这些质粒转染到HEK293细胞中，Flex和IP3功能检测的结果表明在mGluR2中只存在反式激活效应，与之前报道的mGluR5中既有顺式激活又有反式激活的结果不同。这表明在mGluR2的激活过程中具有一定的单体选择机制。基于mGluR5和mGluR2激活方式的差异，我们又研究了CRD在单体选择机制中的作用。将mGluR2的CRD替换成mGluR5的CRD之后，发现在mGluR2中可能还具有顺式激活效应，这表明CRD在单体选择机制中确实具有重要作用，但结果尚需确认。 总之，本文发现mGluR2中只具有反式激活效应，并且可能是CRD区影响了其激活过程中对特定单体的选择。这为该类受体中从VFTs-CRDs到HDs的激活信号传导过程的研究，乃至整个C族GPCRs的激活机制的研究提供了一定的基础，同时也有助于以该类受体为靶点的药物开发。
【关键词】：代谢型谷氨酸受体2 顺反激活效应 单体选择机制 半胱氨酸富合域
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3411
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 绪论8-23
• 1.1 mGluRs 的分类和结构8-15
• 1.2 mGluRs 在结构上的特点15-16
• 1.3 mGluRs 的激活机制16-19
• 1.4 mGluRs 激活过程中的顺反效应19-20
• 1.5 本课题的研究目标、内容和意义20-23
• 2 实验技术原理23-29
• 2.1 人胚胎肾细胞（HEK293）的培养23
• 2.2 琼脂糖凝胶电泳23-24
• 2.3 点突变24
• 2.4 电穿孔转染24-25
• 2.5 酶联免疫吸附检测（ELISA）25-26
• 2.6 ~3H-IP3产量测定法26-27
• 2.7 Ca~(2+)流检测（Flex）27
• 2.8 FRET 检测27-28
• 2.9 Binding assay28-29
• 3 材料与方法29-41
• 3.1 实验材料29
• 3.2 实验方法29-41
• 4 实验结果与讨论41-56
• 4.1 实验结果41-54
• 4.2 讨论与展望54-56
• 致谢56-58
• 参考文献58-64
• 附录 主要符号和缩略词表64

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张文华;王云云;丁明柳;刘剑峰;;GABA受体与脆性X染色体综合征研究新进展[J];生物物理学报;2013年11期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 赵亚丽;GRM7、GRM3、CMYA5基因与精神分裂症相关性研究[D];北京协和医学院;2010年

2 曹全梁;磁靶向系统中磁流体动态特性和行为控制研究[D];华中科技大学;2013年

3 郑聪霞;人大麻素受体CB2的内吞和信号转导机制研究[D];浙江大学;2012年

4 夏晶;GABA能改善慢性吗啡暴露猫初级视皮层功能[D];中国科学技术大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 景坤玉;钙敏感受体基因启动子区在食管鳞癌中频繁甲基化的初步研究[D];郑州大学;2013年

2 汪瑞林;甲基苯丙胺及HIV-Tat蛋白协同致大鼠相关脑区mGluR1和mGluR5表达变化的研究[D];昆明医科大学;2013年

3 肖胜杰;代谢型谷氨酸受体组成性活性突变体的构建和功能检测[D];华中科技大学;2013年

4 宋晓盛;用于药物筛选的mGluR2突变体和用于失敏机制研究的mGluR5突变体的构建及其功能检测[D];华中科技大学;2013年

本文编号：760938