重组人神经生长因子rh-β-NGF真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

发布时间：2017-08-30 23:17

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【摘要】：为大量制备β-NGF,构建了一种稳定、高效表达重组人神经生长因子(Recombinant human nerve growth factor,rh-β-NGF)的真核表达载体及含该重组载体的HEK293细胞株。首先,构建重组质粒p CMV-β-NGF-IRES-dhfr并转染至HEK293细胞系,用MTX加压筛选和有限稀释法进行选择,获得高效表达rh-β-NGF的单克隆重组细胞株;随后逐步降低血清培养,最终使细胞株完全适应无血清培养基并稳定表达rh-β-NGF;SDS-PAGE分析该表达产物,可见相对分子质量约13 k Da的条带,纯度大于50%,经质谱法测定得到其肽图谱与理论序列完全匹配,接着利用离子交换层析和分子筛层析纯化rh-β-NGF;最后进行重组细胞株表达效率和表达稳定性检测,表明重组细胞株可稳定、高效表达rh-β-NGF,其分泌效率大于20 pg/(cell?d),并能诱导PC12细胞的分化,具有良好的生物学活性。
【作者单位】： 第四军医大学基础部病理教研室;深圳市港科深研生物科技有限公司;
【关键词】： 重组 神经生长因子 真核载体 HEK细胞 活性鉴定
【基金】：国家自然科学基金(Nos.81101711,81101752) 重大新药创制科技重大专项(No.2009ZX09102-226)资助~~
【分类号】：R3416;Q78
【正文快照】： 神经生长因子(NGF)是神经营养因子中最早被发现、目前研究最为透彻的一种神经细胞生长调节因子,具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能,它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用[1]。关于NGF,已有很多的基础研究和临床应用,旨

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本文编号：762057